Efeito do tratamento com agentes hipometilantes: modulação das funções de monócitos e macrófagos e possível repercussão terapêutica

• Autor(a) principal: Zambuzi, Fabiana Albani
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60140/tde-18122019-171349/
• topic: Agentes hipometilantes; Hypomethylating agentes; Imune response; Macrófagos; Macrophages; Myelodysplastic syndrome; Resposta imune; Síndrome Mielodisplásica

A utilização de estratégias terapêuticas baseadas na manipulação das alterações epigenéticas tem despertado interesse de diferentes grupos de pesquisa. Dentre as epidrugs, os agentes hipometilantes tem um papel bem estabelecido no tratamento de pacientes com síndrome mielodisplásica e outras neoplasias hematológicas. Além dos efeitos diretos sobre as células tumorais, existem várias evidências que indicam que a as células do sistema imune sejam diretamente afetadas pelo tratamento, com efeitos demonstrados sobre a função de células NK, linfócitos e células dendríticas. Porém, pouco foi descrito sobre a modulação exercida pelos agentes hipometilantes sobre a função de monócitos e macrófagos humanos. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi definir os efeitos do tratamento com Decitabina no fenótipo e funções de monócitos e macrófagos e a possível imunomodulação em pacientes com Síndrome Mielodisplásica (SMD) tratados Azacitidina. Inicialmente, monócitos foram isolados de indivíduos saudáveis (n=30) e tratados com 5?M de Decitabina por 24 horas. Após o tratamento, as células foram infectadas in vitro com Mycobacterium tuberculosis (Mtb) para avaliação dos efeitos sobre as funções celulares importantes no controle da infecção. Os monócitos também foram diferenciados em macrófagos na presença do agente hipometilante para determinação do perfil de polarização celular, através de expressão gênica e de marcadores de superfície. O tratamento com Decitabina induziu aumento na fagocitose e liberação de IL-8, porém prejudicou a atividade microbicida dos monócitos em resposta ao Mtb. Além disso, observou-se que o tratamento favoreceu a polarização de macrófagos para o perfil M2, determinado por alterações morfológicas e aumento da expressão de CD206 e ALOX15. Funcionalmente, essas células demonstraram redução do controle da infecção, apesar de produzirem mediadores inflamatórias de maneira semelhante às células não tratadas. Apesar disso, quando co-cultivados com linfócitos em modelo de granuloma in vitro, Decitabina promoveu redução na produção de IL-1?, TNF-? e IFN-?, com produção semelhante de IL-10, sugerindo um efeito imunomodulador que poderia induzir mecanismos reguladores da resposta imune. Por fim, para avaliação da imunomodulação em pacientes com SMD, foram recrutados 17 indivíduos em tratamento de suporte e 4 pacientes em tratados com o agente hipometilante Azacitidina. A partir de amostras de sangue periférico, o plasma foi separado para quantificação de mediadores imunológicos e a fração celular foi utilizada para da expressão gênica e isolamento de monócitos para avaliações funcionais após infecção por Mtb. Foram observadas alterações na quantificação de mediadores no plasma, com aumento de IL-2, IL-4, IL-12, IL-17, IFN-?, TNF-? e IL-1? nos pacientes em tratamento com azacitidina em relação aos não tratados, restabelecendo níveis semelhantes ao grupo controle, além de aumento de IL-8 e IP-10 quando comparados aos indivíduos saudáveis. Em relação à função dos monócitos, observou-se aumento na produção de IL-8 e IL-12 após a infecção por Mtb, porém nenhuma modulação sobre a função fagocítica e microbicida foi observada nestes pacientes. Assim, os dados sugerem que os agentes hipometilantes exercem modulação importante sobre a função de monócitos e macrófagos, podendo influenciar no padrão de resposta e, desta forma, constituindo uma potencial estratégia terapêutica de manipulação do sistema imune