Isolamento, identificação e caracterização de seqüências expressas de DNA (ESTs) de genes regulados por glicocorticóides na reversão fenotípica tumoral-normal de células ST1 de glioma de rato

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Vedoy, Cleber Giovane
Data de Publicação: 2000
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-27082019-092314/
Resumo: Os hormônios glicocorticóides causam uma completa reversão tanto \"in vitro\" quanto \"in vivo\" do fenótipo tumoral para normal, na linhagem celular ST1 de glioma de rato (Armelin & Armelin, 1983) que é um variante da linhagem C6 de glioma de rato. Neste trabalho, foram construídas bibliotecas normalizadas de cDNAs subtraídos e normalizadas, através da metodologia de PCR supressivo, para identificar genes regulados por glicocorticóides, potencialmente envolvidos na reversão fenotípica de células ST1. A construção e análise de duas bibliotecas de cDNAs subtraídos, permitiu o isolamento de 7 genes diferencialmente expressos, alguns dos quais são conhecidos efetores do controle da proliferação celular e/ou diferenciação: trombospondina-1, ciclina G, tirosina fosfatase CL100 e NRP/B. Foi isolado, também, um clone similar a tenascina-X, que apresenta um transcrito de tamanho diferente. O isolamento e caracterização de um cDNA completo correspondente a esse transcrito revelou que é constituído apenas por motivos de fibronectina tipo III e fibrinogênio. A dramática indução deste transcrito por hidrocortisona sugere um papel potencial para esse variante de TN-X no controle da proliferação celular. A análise da expressão destes genes em células P7, um variante de C6 que não sofre reversão fenotípica mediada com glicocorticóides, e em células U87 de glioblastoma humano, revelou que são expressos em níveis muito baixos ou indetectáveis, nestas células indicando que o produto destes genes pode ter um papel importante na reversão fenotípica tumoral-normal. A prevalência de transcritos raros e diferencialmente expressos nestas bibliotecas, mostra que são adequadas para o rastreamento, através de métodos automatizados de microarranjos de DNA, para a validação de clones diferencialmente expressos, podendo revelar, rapidamente, um painel de genes candidatos a estarem envolvidos nas respostas anti-proliferativa e anti-tumoral dos glicocorticóides.
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