Impacto da administração subcutânea de AMD3100 isolado ou em associação a agonista de receptor β3 adrenérgico na regeneração endometrial, nos desfechos reprodutivos e na prole de modelo experimental murino de endométrio fino

• Autor(a) principal: Rossato, Serena
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-12042024-091445/
• topic: AMD3100; AMD3100; Célula tronco mesenquimal; CXCR-4; CXCR4; Endométrio fino; Infertilidade; Infertility; Mesenchymal stem cell; Thin endometrium

Objetivo: O endométrio fino (EF) representa um grande desafio na reprodução assistida, pois está relacionado à diminuição da receptividade endometrial e consequente falha na implantação, afetando negativamente os resultados reprodutivos. A aplicação de células-tronco mesenquimais (CTM) tem mostrado resultados promissores, pois suas propriedades regenerativas melhoram a espessura e a expressão de biomarcadores de receptividade no endométrio. No entanto, os custos e os processos complexos envolvidos nesses tratamentos dificultam o estabelecimento de um protocolo de rotina. Nesse contexto, há a necessidade de criar estratégias que estimulem o recrutamento e migração de células-tronco específicas para locais de lesão tecidual por meio de cascatas endógenas, promovendo um uso clínico viável. O AMD3100 é um antagonista do receptor CXCR4, que interrompe o eixo CXCL12-CXCR4 - o qual está diretamente relacionado à migração de células-tronco - e tem sido usado em estudos de regeneração de tecidos para aumentar o influxo de células-tronco para locais de injúria tecidual. Além disso, seu uso combinado com agonistas do receptor &beta;3 adrenérgico leva ao recrutamento seletivo de CTM com melhores resultados regenerativos comprovados em um artigo recente sobre consolidação de fraturas ósseas. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar o potencial regenerativo de AMD3100 sozinho ou em associação com um agonista de receptor &beta;3 adrenérgico em um modelo animal murino de EF e seu impacto nos resultados reprodutivos. Métodos: Os experimentos foram realizados em camundongos fêmeas C57Bl/6 (9 semanas de idade; 20 g). O EF foi induzido por aplicação direta de etanol a 95% no útero exposto por meio de uma incisão abdominal, enquanto solução salina tamponada com fosfato (PBS) foi usada no procedimento sham (SH). Os camundongos de cada grupo foram divididos aleatoriamente em 3 subgrupos de tratamento (n = 8 para cada): (1) PBS (PL); (2) AMD 3100 (5 mg/kg sc) dose única imediatamente após a cirurgia (AMD); (3) BRL 37344 (agonista do receptor &beta;3 adrenérgico seletivo para roedores) (10 mg/kg sc) por 4 dias consecutivos antes da cirurgia mais AMD3100 (5 mg/kg sc) dose única (AMD/&beta;3). Dois ciclos estrais após a modelagem e tratamento, todos os grupos foram colocados em acasalamento por 4 semanas com machos C57BL/6 de fertilidade comprovada. A taxa de gravidez, o tamanho e outros parâmetros de desenvolvimento da ninhada foram analisados para estabelecer o impacto dos tratamentos nos desfechos reprodutivos. Além disso, uma análise anatômica macroscópica foi realizada na prole para avaliar possíveis efeitos teratogênicos. Imuno-histoquímica foi realizada para avaliar a expressão do receptor de progesterona e &alpha;v&beta;3 integrina no útero pré e pós-gestacional após os tratamentos. Resultados: Em relação às taxas de gravidez, 23 dos 24 camundongos SH engravidaram (independente do tratamento recebido). O modelo de EF reproduziu os resultados da literatura, com menos de 30% de falha na indução de dano endometrial, representado por uma taxa de gravidez de 25% (2/8) no grupo EF+PL em comparação com todos os grupos SH (p<0,05). O tratamento AMD/B3 restaurou completamente a função endometrial, promovendo taxas de gravidez semelhantes para todos os grupos SH (p>0,05). Não houve diferença entre o grupo de tratamento EF+AMD e todos os outros grupos (p>0,05) em termos de gravidez, embora tenha sido encontrada uma diferença clinicamente relevante entre os grupos EF+PL e EF+AMD (25% versus 62,5% , respectivamente). O tamanho da ninhada foi semelhante entre os grupos de tratamento, exceto para o grupo EF+AMD com menor número de recém-nascidos. Quanto ao potencial teratogênico das drogas testadas (AMD e &beta; agonista), não observamos nenhuma malformação macroscópica relevante (interna e externa) nos grupos tratados. A análise imuno-histoquímica do útero pré-gestacional quanto à expressão de receptores de progesterona no endométrio mostrou redução nos grupos EF em relação ao grupo SH (p<0,05). O tratamento com AMD3100 associado ao &beta;3 agonista restaurou a expressão normal dos receptores de progesterona em comparação ao grupo EF+PL (p>0,05), enquanto o grupo EF+AMD não apresentou tal efeito. Tais tratamentos também mostraram efeito pós gestacional prolongado em expressão de receptores de progesterona. Não houve diferença relevante na expressão de &alpha;v&beta;3 integrina entre os grupos. Conclusão: Nossos achados indicam uma potencial opção terapêutica para casos de infertilidade relacionada ao fator endometrial. O tratamento combinado com AMD3100 e agonista do receptor &beta;3 adrenérgico resultou em melhora expressiva nos resultados reprodutivos, sem prejuízo para o desenvolvimento e anatomia da prole. Além disso, este tratamento utiliza duas classes de medicamentos aprovados clinicamente, o que pode reduzir o tempo e o custo das aplicações terapêuticas translacionais no futuro.