Papel do secretoma de linhagens de câncer de mama em modelo de angiogênese experimental

• Autor(a) principal: Ribeiro, Maria Fernanda de Paula
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-11022020-120605/
• topic: Angiogênese; Angiogenesis; Breast cancer; CAM assay; Câncer de mama; Ensaio de CAM; Exossomos; Exossomos

Câncer é o nome dado a um conjunto de mais de 100 doenças que têm em comum o crescimento desordenado de células que invadem os tecidos e órgãos. O câncer de mama é caracterizado pelo crescimento descontrolado de células da mama que adquiriram características anormais, e pode se apresentar de formas distintas como: carcinoma in situ, carcinoma invasivo, carcinoma metastático, adenocarcinoma e sarcoma. Cerca de 25% dos novos casos de câncer ao ano são de mama, entre eles apenas 1% atinge os homens. Atualmente tem sido descritas moléculas secretadas em vesículas de diferentes tamanhos por células que atuam como comunicadores celulares carregando diferentes tipos de proteínas, citocinas, fatores de crescimento e RNAs não codificadores. Dentre essas vesículas estão os exossomos, que são vesículas de membranas secretadas com 40-150nm de diâmetro, formadas durante o invaginamento de endossomos tardios e que são potentes fatores pró-angiogênicos. Além de induzir a angiogênese, são importantes biomarcadores tumorais. Estimulam a proliferação celular endotelial, migração e a formação do tubo in vitro. Promovem a proliferação de células endoteliais e formação de vasos. Influenciam a progressão do tumor, metástase e a eficácia terapêutica. Neste trabalho comparamos dois protocolos de isolamento de exossomos utilizando meios condicionados de células de linhagem de mama não maligna MCF10A e maligna Hs578T utilizando a estratégia de ultrafiltração combinada apenas à ultracentrifugação ou à ultracentrifugação e precipitação com um kit comercial visando a análise do papel angiogênicos em modelos experimentais de angiogênese. Analisamos o potencial angiogênico de exossomos isolados de meio condicionado da linhagem mais maligna de células de câncer de mama através de um modelo experimental de angiogênese utilizando células da veia do cordão umbilical (HUVEC) em gel de fibrina, e padronizamos a histologia da membrana corioalantoide de embrião de galinha para futuros ensaios com os exossomos isolados. Determinamos que o melhor protocolo para o isolamento de exossomos das linhagens de mama foi o protocolo que envolveu a estratégia de ultrafiltração seguida apenas de ultracentrifugação. Foi isolado maior quantidade de exossomos nas células não malignas MCF10A em ambos os protocolos testados. O teste da adição dos exossomos isolados das células Hs578T no gel de fibrina, contendo células HUVEC semeadas em microcarregadores, mostrou o papel angiogênico dessas partículas após 6 dias em cultura. Análises futuras da aplicação dos exossomos isolados na membrana corioalantide de embrião de galinha (CAM) poderão comprovar o papel angiogênico ex-vivo dessas partículas isoladas de diversas células de mama com diferentes graus de malignidade. Espera-se desta forma determinar o nível angiogênico do secretoma das linhagens de câncer de mama, visando um modelo para testar drogas e medicamentos que possam diminuir a angiogênese no câncer.