A importância das peptidases parasitárias no fornecimento de aminoácidos em promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ferrão, Thiago Fidelis
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5179/tde-29102020-182811/
Resumo: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença amplamente distribuída no Brasil e no mundo, com alta morbidade e mortalidade. No Brasil, é causada pela espécie Leishmania (L.) infantum com transmissão vetorial através de fêmeas de Lutzomyia longipalpis. O parasito apresenta duas formas em seu ciclo de vida, as promastigotas presentes em insetos vetores e as amastigotas, presentes em células de mamíferos. A nutrição do parasito depende de aminoacidos obtidos por interações com o hospedeiro. Diferentes peptidases já foram documentadas no gênero Leishmania, com quatro grupos de acordo com o sitio ativo. Neste trabalho, avaliamos o papel de peptidases parasitárias em processos nutricionais na sobrevivência e multiplicação de promastigotas de L .(L.) infantum. Promastigotas foram cultivadas em meio padrão (MP199). O número de promastigotas foi acompanhado diariamente, e no 3 dia de permanencia em cultura os parasitos e o meio foram analisados em relação a sua composição. Os dados obtidos foram utilizados como referência para padronização das técnicas analíticas posteriormente empregadas nos parasitos obtidos de meios ricos em aminoacidos livres (MRA) e rico em proteina (MRP) e seus sobrenadantes de cultura. A comparação entre os parasitos mantidos em MRA e MRP demontrou uma maior concentração de proteinas em MRP 26,22 Micro Gramag/mL em relação a MRA 10,71 Micro Grama/mL. As alterações morfológicas mostraram maior espessamento de glicocálice em promastigotas com maior atividade proteolítica obtidas de MRP, detectada com substratos proteicos marcados com fluorocromo FITC. Os dados aqui obtidos sugerem que as peptidases parasitárias têm atividades nutricionais e meios contendo proteínas em sua composição levam a alterações parasitarias induzindo a ação de peptidases e modificações da superfície do parasito para permitir maior facilidade do processamento destas moléculas e aquisição de aminoácidos, uma visão diferente da função destas enzimas possibilita um melhor entendimento do metabolismo parasitário e sua disponibilidade como alvo de novas drogas
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Neste trabalho, avaliamos o papel de peptidases parasitárias em processos nutricionais na sobrevivência e multiplicação de promastigotas de L .(L.) infantum. Promastigotas foram cultivadas em meio padrão (MP199). O número de promastigotas foi acompanhado diariamente, e no 3 dia de permanencia em cultura os parasitos e o meio foram analisados em relação a sua composição. Os dados obtidos foram utilizados como referência para padronização das técnicas analíticas posteriormente empregadas nos parasitos obtidos de meios ricos em aminoacidos livres (MRA) e rico em proteina (MRP) e seus sobrenadantes de cultura. A comparação entre os parasitos mantidos em MRA e MRP demontrou uma maior concentração de proteinas em MRP 26,22 Micro Gramag/mL em relação a MRA 10,71 Micro Grama/mL. As alterações morfológicas mostraram maior espessamento de glicocálice em promastigotas com maior atividade proteolítica obtidas de MRP, detectada com substratos proteicos marcados com fluorocromo FITC. Os dados aqui obtidos sugerem que as peptidases parasitárias têm atividades nutricionais e meios contendo proteínas em sua composição levam a alterações parasitarias induzindo a ação de peptidases e modificações da superfície do parasito para permitir maior facilidade do processamento destas moléculas e aquisição de aminoácidos, uma visão diferente da função destas enzimas possibilita um melhor entendimento do metabolismo parasitário e sua disponibilidade como alvo de novas drogasVisceral leishmaniasis (VL) is a disease widely distributed in Brazil and worldwide, with high morbidity and mortality. In Brazil, it is caused by the species Leishmania (L.) infantum with vector transmission by females of Lutzomyia longipalpis. The parasite has two forms in its life cycle, the promastigotes present in insect vectors and amastigotes present in mammalian cells. The parasite\'s nutrition depends on amino acids obtained by interactions with the host. Different peptidases have already been documented in the Leishmania parasites, with four groups according to the active site. In this work, we evaluate the role of parasitic peptidases in nutritional processes, survival and multiplication promastigotes of L. (L.) infantum. Promastigotes were grown in standard medium (MP199). The number of parasites was monitored daily and on the 3rd day of stay in culture medium the parasites were analyzed in relation to its composition. The data obtained were used as a reference to standardize the analytical techniques used later in the parasites, captured by means rich in free amino acids (MRA) and rich in protein (MRP) and their culture supernatants. The comparison between parasites maintained in MRA and MRP demonstrates a higher protein concentration in MRP 26.22 Micro Grama / mL compared to MRA 10.71 Micro Grama / mL. As the morphological changes show a greater thickening of glycocalyx in promastigotes with greater proteolytic activity applied to MRP, detected with protein substrates marked with fluorochrome FITC. The data suggested here as parasitic peptidases present nutritional activities and methods that cause effects on their composition and cause parasitic changes inducing the actions of peptidases and modifications of the parasite surface to allow greater ease of use of the molecules and samples of amino acids, a different way from The function of these enzymes allows a better understanding of parasitic metabolism and its availability as a target for new drugsBiblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPAndrade Junior, Heitor Franco deFerrão, Thiago Fidelis2020-07-16info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5179/tde-29102020-182811/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2020-11-01T02:09:02Zoai:teses.usp.br:tde-29102020-182811Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212020-11-01T02:09:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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