Produção de celulases e fusão de protoplastos em Humicola sp

• Autor(a) principal: Neirotti Roumas, Edison
• Data de Publicação: 1988
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-20210104-162124/
• topic: CELULASE; FUNGOS CELULOLÍTICOS; FUSÃO DE PROTOPLASTOS; PRODUÇÃO

O presente trabalho teve por objetivo desenvolver a tecnologia de fusão de protoplastos em Humicola sp com a finalidade do seu estudo genético, visando incrementar a sua produção de celulases e estabelecer um programa de melhoramento genético para este fungo. Nesse plano foram estudadas entre outras, a otimização da regeneração de protoplastos, a sobrevivência a luz ultravioleta, a obtenção de mutantes e a seleção de variantes de maior produção de enzimas celulolíticas. Dado que o Humicola sp apresenta conídios multinucleados, a obtenção de mutantes foi realizada por irradiação de protoplastos com luz ultravioleta. Do estudo de obtenção de protoplastos, tempo de tratamento enzimático do micélio e número de núcleos presentes por protoplasto, foi observado que com tratamentos por períodos curtos de tempo (30 minutos) obtinha-se a maior porcentagem de protoplastos uninucleados, condição favorável para a obtenção de mutantes. Para a seleção de variantes de maior produção de enzimas foi necessário o desenvolvimento de uma técnica simples, específica para a linhagem de Humicola estudada, que permitisse de forma fácil e rápida quantificar a produção de celulases. A produção de celulases, das variantes selecionadas, foi quantificada pela determinação da celulase total (FPA). Finalmente foram estudadas as condições de fusão de protoplastos, na linhagem utilizada, por tratamento com polietilenoglicol e pela técnica de eletrofusão.