Prospecção de anticorpos monoclonais humanos anti-Zika por phage display

• Autor(a) principal: Silva, Isaura Beatriz Borges
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-15092023-094854/
• topic: Phage Display; Diagnosis; Diagnóstico; Phage Display; Zika virus; Zika vírus

O vírus Zika (ZIKV) é um vírus emergente transmitido por artrópodes (arbovírus) e tem causado grande preocupação global, particularmente devido às síndromes congênitas e neurológicas associadas a esse vírus. Os sintomas clínicos iniciais da maioria dos arbovírus são muito semelhantes, tornando o diagnóstico clínico incerto e o diagnóstico laboratorial por sorologia com baixa acurácia entre os vírus antigenicamente relacionados, o que resulta na subnotificação das doenças por eles causadas. O ZIKV pertencente ao gênero Flavivirus, da família Flaviviridae, que também inclui alguns outros patógenos humanos importantes, como o vírus da dengue (DENV). Nestas infecções, a caracterização da imunidade humoral por meio do uso de anticorpos monoclonais associado a estudos estruturais representa um componente importante no fornecimento de informações quanto ao perfil antigênico, sendo essencial para o desenvolvimento de novos métodos de diagnóstico, terapêuticos e vacinas efetivas. Diante disso, foi objetivo do presente estudo o emprego da técnica phage display usando uma biblioteca de genes de anticorpos humanos para seleção de anticorpos monoclonais contra o ZIKV. Foram realizadas duas estratégias de biosseleção, a primeira foi uma biosseleção direta contra partículas de ZIKV, na segunda foi realizada uma abordagem de subtrativa, aplicando etapas de seleção negativa e positiva contra o ZIKV e o DENV2, sorotipo de DENV mais circulante atualmente no país e o mais associado a casos severos dentre os sorotipos. Após os ciclos de biosseleção, foi realizado um Sequenciamento de Nova Geração (NGS) das regiões VH e VL do DNA fagomídeo e análise dos dados obtidos. Posteriormente, foi realizado o desenho de fragmentos variáveis de cadeia única (scFvs) seguido de análises in silico dessas estruturas. Os resultados obtidos indicam que foram selecionadas sequências VHs e VLs com elevado enriquecimento na biosseleção, sugerindo uma elevada afinidade ao ZIKV e DENV2. Além disso, na segunda estratégia, foi possível obter sequências na seleção para o ZIKV que não se manifestaram ao longo da seleção para DENV2 e vice-versa. As análises in silico sugerem as possíveis interações dos scFvs com a proteína E do ZIKV e algumas das propriedades envolvidas nessas interações. A partir disso, esperamos poder contribuir para geração de novas perspectivas para o desenvolvimento de plataformas diagnósticas mais precisas para o ZIKV, contribuindo para maior eficiência no controle epidemiológico e, assim, melhor controle de dispersão e medidas contra infecções pelo ZIKV.