Incorporação de aminoácidos in vitro por uma fração microssomal

• Autor(a) principal: Torres, Bayardo Baptista
• Data de Publicação: 1972
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-29042014-110000/
• topic: Aminoácidos; Aminoacids; Enzimas; Membrana; Membrane; Microsoma; Microsomes; Protein synthesis; Proteinas (Síntese); Síntese proteica

Foi isolada uma sub-fração de microsomas, constituída por membranas do retículo endoplasmático, através do tratamento do sobrenadante pós-mitocondrial por detergente. Em testes de microscopia eletrônica e ultracentrifugação analítica, esta preparação de membranas apresentou-se livre de contaminação por outras organelas celulares. Quando incubada em condições adequadas, a fração de membranas incorpora vários aminoácidos em um produto insolúvel em TCA a quente. O tratamento do material incorporado com enzimas proteolíticas acarreta a perda de cerca de 60% da radioatividade derivada de aminoácidos marcados. Não há liberação de radioatividade por tratamento com RNase, DNase, lecitinase ou α-amilase. A remoção de aminoácidos terminais não implica em diminuição considerável de radioatividade. As melhores condições de pH e concentração de Mg para o processo são próximas às fisiológicas. O requerimento de ATP e enzima pH 5 no meio de incubação não é absoluto, mas sua adição estimula o processo. Há indicações de que a independência de fornecimento externo de GTP para o processo resulta de um conteúdo endógeno da partícula. o processo de incorporação é inibido em parte por RNase, NaF, puromicina e anisomicina.