Avaliação dos efeitos anti-inflamatórios de diferentes hemocomponentes em co-cultura de cartilagem e células derivadas de membrana sinovial de equinos

• Autor(a) principal: Seidel, Sarah Raphaela Torquato
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10136/tde-13052024-140116/
• topic: Co-cultura; Co-culture system; Freeze-dried PRP; Lisado plaquetário; Plasma rico em plaquetas; Platelet lysate; Platelet-rich plasma; PRP liofilizado

O uso de ortobiológicos, como o Plasma Rico em Plaquetas (PRP), já é uma realidade na medicina equina há alguns anos, porém segue enfrentando certas limitações relacionadas desde à grande variabilidade de protocolos utilizados até desfechos clínicos por vezes divergentes dos encontrados em ensaios clínicos. Esse estudo foi desenvolvido com dois objetivos principais: validar um protocolo de produção de PRP Liofilizado e Lisado Plaquetário (LP), obtidos a partir de PRP; conduzir um teste pré- clínico mensurando a capacidade anti-inflamatória desses hemocomponentes em co- cultura de tecido articular. Dentre as hipóteses que nos embasaram estão: os hemocomponentes manterão a concentração de fatores de crescimento independente do produto final, e a resposta inflamatória inicial será seguida de resposta resolutiva em ambiente in vitro. A metodologia foi dividida em duas etapas. Primeiramente os três hemocomponentes foram produzidos de seis doadores saudáveis e armazenados em diferentes temperaturas durante 30 dias, sendo mensurados seu conteúdo celular, bioquímico, Fator de Crescimento Transformante β1 (TGF- β1), interleucinas (IL) 1 β, 6 e 10 e Fator de Necrose Tumoral Alfa (TNF-α). Os hemocomponentes de um doador foram selecionados para armazenamento por até dois anos. Na segunda etapa, as co-culturas foram produzidas com explante de cartilagem e células derivadas de membrana sinovial de seis doadores de tecido articular. Dos oito poços de co-cultura, quatro foram estimulados com lipopolissacarídeo, e cada um dos oito poços recebeu um dos quatro tratamentos: meio de cultura, PRP, PRP liofilizado e Lisado Plaquetário. Os explantes foram avaliados histologicamente e por meio de microscopia eletrônica de varredura. As células foram avaliadas quanto à sua viabilidade ao fim da cultura. Nos sobrenadantes foram mensurados concentração de prostaglandina E2 (PGE2), interleucinas 1 beta, 6 e 10, TNF-α, TGF-β1 e glicosaminoglicanos. Os hemocomponentes produzidos na primeira fase apresentaram concentração semelhante de TGF-β1 quando armazenados a -80ºC por trinta dias e dois anos, com diminuição quando armazenados a -20ºC por um ano. A concentração de citocinas diminuiu drasticamente em todos os hemocomponentes armazenados em temperatura ambiente por 30 dias. Com relação às co-culturas, o tratamento com os ortobiológicos resultou em liberação estável de TGF-β1 ao longo do tempo, PGE2 apresentou maiores concentrações em 0 e 48 h, retornando a valores basais em 144 h, enquanto as concentrações de IL-1β, IL-10 e TNF-α apresentaram aumento nas amostras tratadas com PRP e LP em 144 h. Dermatan sulfato (DS) e Condroitin sulfato (CS) resultaram em valores similares em todos os tratamentos em 144 h. Os protocolos utilizados resultaram em hemocomponentes com características semelhantes entre si quando armazenados a -80ºC por 30 dias, e sua utilização como tratamento em sistema de co-cultura de tecido articular apresentou perfil inflamatório inicial, seguido de possível fase pró-resolutiva, com aumento dos fatores anti- inflamatórios.