Cultivo de linhagem de Pseudomonas putida recombinante em biorreator para produção de compostos fenólicos.

• Autor(a) principal: Pantoja, Raoní Kempfer
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-23032022-142758/
• topic: Ácido gálico; Biologia sintética; Engenharia metabólica. Glicerol; Gallic acid; Glycerol; Metabolic engineering; Synthetic biology

Os compostos fenólicos em sua maioria apresentam alto valor econômico devido às suas múltiplas aplicações principalmente pelo seu conteúdo de atividades biológicas e químicas de interesse humano. Algumas dessas moléculas, como o ácido gálico, apresentam múltiplas aplicações terapêuticas e geralmente são obtidas a partir de extratos vegetais, portanto, seria ambientalmente correto estudar sua produção microbiana em condições controladas. Até à data, foram obtidas poucas bactérias recombinantes produtoras de fenólicos. Bactérias do gênero Pseudomonas possuem rotas metabólicas capazes sintetizar substâncias aromáticas a partir de fontes renováveis de carbono, além de serem naturalmente resistentes a altas concentrações de compostos aromáticos, o que evidencia a possibilidade do uso de espécies como Pseudomonas putida para aumentar a disponibilidade de tais moléculas no mercado. Assim, o presente trabalho propõe a utilização da cepa de P. putida previamente modificada em nível genético por meio de técnicas de engenharia metabólica para à produção de fenólicos. Essas modificações consistiram na deleção de genes destinados ao consumo de ácido gálico e inserção ou modificação de genes da rota do chiquimato. O objetivo foi definir parâmetros de cultura para a cepa recombinante em biorreator. A produção foi avaliada em espectrofotômetro atingindo cerca de 2 g/L de cultivo em frascos agitados. A estabilidade do plasmídeo foi demonstrada em até 168 h antes de submeter a cepa a experimentos em biorreator sob condições controladas. Os ensaios do biorreator duraram até 73 h, definindo parâmetros cinéticos para esta cepa, e atingindo 0,2 g/L de produção de ácido gálico por 1,35 g de massa celular por litro que foi medida pela metodologia de Cromatografia Líquida de Alta Performance (HPLC) descrita neste trabalho. Resultados indicam a viabilidade da utilização de glicerol na produção de ácido gálico nessa nova recombinante.