Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Elias, Caroline Cristina
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-23112015-083845/
Resumo: A enzima conversora de angiotensina (ECA) catalisa a conversão de angiotensina I (Ang I) no vasoconstritor angiotensina II (Ang II) e hidrolisa a bradicinina (BK). ECA somática (sECA) possui dois domínios homólogos (N e C) que têm 60% de identidade. Embora estas duas regiões tenham homologia grande, o sítio catalítico C-domínio exibe uma atividade três vezes maior do que o N-domínio na hidrolise de Ang I in vivo. Este fato torna interessante o desenvolvimento de novos estudos de inibidores ou a melhoria dos já existentes. O objetivo deste estudo foi obter a região Ala959 até Ser1066 do Cdomínio da sECA (c-sECA), em uma estrutura conformacional semelhante à estrutura nativa. Nós amplificamos a sequência correspondente ao sítio catalítico da c-sECA com 324pb e clonamos esta sequência no vetor pET 28a(+). O segmento (nomeado de pET28_c-sECA) foi expresso em sistema bacteriano. A proteína foi expressa na forma solúvel e a purificação foi feita em uma única etapa utilizando a coluna de afinidade His-tag, a qual produziu a proteína pura. Análises estruturais por dicroísmo circular e fluorescência confirmaram que a proteína recombinante estava na conformação correta, e os ensaios de atividade mostraram que a c-sECA possui atividade enzimática e é inibida por lisinopril.
id USP_930b51344fd8e8792d06587e168bdb94
oai_identifier_str oai:teses.usp.br:tde-23112015-083845
network_acronym_str USP
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
repository_id_str 2721
spelling Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066Obtaining, structural characterization and enzymatic activity of the C catalytic site of angiotensin convertin enzyme I ALA959 to SER1066 regionACEC-domainC-domínioECAsACEsECAA enzima conversora de angiotensina (ECA) catalisa a conversão de angiotensina I (Ang I) no vasoconstritor angiotensina II (Ang II) e hidrolisa a bradicinina (BK). ECA somática (sECA) possui dois domínios homólogos (N e C) que têm 60% de identidade. Embora estas duas regiões tenham homologia grande, o sítio catalítico C-domínio exibe uma atividade três vezes maior do que o N-domínio na hidrolise de Ang I in vivo. Este fato torna interessante o desenvolvimento de novos estudos de inibidores ou a melhoria dos já existentes. O objetivo deste estudo foi obter a região Ala959 até Ser1066 do Cdomínio da sECA (c-sECA), em uma estrutura conformacional semelhante à estrutura nativa. Nós amplificamos a sequência correspondente ao sítio catalítico da c-sECA com 324pb e clonamos esta sequência no vetor pET 28a(+). O segmento (nomeado de pET28_c-sECA) foi expresso em sistema bacteriano. A proteína foi expressa na forma solúvel e a purificação foi feita em uma única etapa utilizando a coluna de afinidade His-tag, a qual produziu a proteína pura. Análises estruturais por dicroísmo circular e fluorescência confirmaram que a proteína recombinante estava na conformação correta, e os ensaios de atividade mostraram que a c-sECA possui atividade enzimática e é inibida por lisinopril.The angiotensin-converting enzyme (ACE) catalyzes the conversion of angiotensin I (Ang I) to the vasoconstrictor angiotensin II (Ang II) and the hydrolysis of bradykinin (BK). Human somatic ACE (sACE) has two homologous domains (N and C) that show 60% identity. Although these two regions have high homology, the catalytic site of the C-domain exhibits three times more activity than that of the N-domain in the hydrolysis of Ang I in vivo. This fact necessitates the development of new inhibitors or the improvement of existing ones. This study aimed to obtain the Ala959 to Ser1066 catalytic region of C-domain of sACE (c-sACE) in a structural conformation that resembles the native structure. We amplified the 324-bp sequence corresponding to the catalytic site of c-sACE and cloned this sequence into a pET28a(+) vector. The segment (named pET28_c-sACE) was expressed in a bacterial system. The expressed protein segment was soluble, and its purification was performed in one step using a His-tag affinity column. Structural analysis by circular dichroism and fluorescence confirmed that the purified protein is correctly folded, and an activity assay showed that c-sACE possesses enzymatic activity and is inhibited by lisinopril.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPAffonso, ReginaElias, Caroline Cristina2015-09-25info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-23112015-083845/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2016-07-28T16:11:58Zoai:teses.usp.br:tde-23112015-083845Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212016-07-28T16:11:58Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
dc.title.none.fl_str_mv Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066
Obtaining, structural characterization and enzymatic activity of the C catalytic site of angiotensin convertin enzyme I ALA959 to SER1066 region
title Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066
spellingShingle Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066
Elias, Caroline Cristina
ACE
C-domain
C-domínio
ECA
sACE
sECA
title_short Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066
title_full Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066
title_fullStr Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066
title_full_unstemmed Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066
title_sort Obtenção, caractetizações estruturais e atividade enzimática do sítio C-catalítico da enzima conversora de angiotensina I - região ALA959 até SER1066
author Elias, Caroline Cristina
author_facet Elias, Caroline Cristina
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Affonso, Regina
dc.contributor.author.fl_str_mv Elias, Caroline Cristina
dc.subject.por.fl_str_mv ACE
C-domain
C-domínio
ECA
sACE
sECA
topic ACE
C-domain
C-domínio
ECA
sACE
sECA
description A enzima conversora de angiotensina (ECA) catalisa a conversão de angiotensina I (Ang I) no vasoconstritor angiotensina II (Ang II) e hidrolisa a bradicinina (BK). ECA somática (sECA) possui dois domínios homólogos (N e C) que têm 60% de identidade. Embora estas duas regiões tenham homologia grande, o sítio catalítico C-domínio exibe uma atividade três vezes maior do que o N-domínio na hidrolise de Ang I in vivo. Este fato torna interessante o desenvolvimento de novos estudos de inibidores ou a melhoria dos já existentes. O objetivo deste estudo foi obter a região Ala959 até Ser1066 do Cdomínio da sECA (c-sECA), em uma estrutura conformacional semelhante à estrutura nativa. Nós amplificamos a sequência correspondente ao sítio catalítico da c-sECA com 324pb e clonamos esta sequência no vetor pET 28a(+). O segmento (nomeado de pET28_c-sECA) foi expresso em sistema bacteriano. A proteína foi expressa na forma solúvel e a purificação foi feita em uma única etapa utilizando a coluna de afinidade His-tag, a qual produziu a proteína pura. Análises estruturais por dicroísmo circular e fluorescência confirmaram que a proteína recombinante estava na conformação correta, e os ensaios de atividade mostraram que a c-sECA possui atividade enzimática e é inibida por lisinopril.
publishDate 2015
dc.date.none.fl_str_mv 2015-09-25
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-23112015-083845/
url http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-23112015-083845/
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv
dc.rights.driver.fl_str_mv Liberar o conteúdo para acesso público.
info:eu-repo/semantics/openAccess
rights_invalid_str_mv Liberar o conteúdo para acesso público.
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.coverage.none.fl_str_mv
dc.publisher.none.fl_str_mv Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
publisher.none.fl_str_mv Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
dc.source.none.fl_str_mv
reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
instname:Universidade de São Paulo (USP)
instacron:USP
instname_str Universidade de São Paulo (USP)
instacron_str USP
institution USP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)
repository.mail.fl_str_mv virginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.br
_version_ 1809091027858882560

Registros relacionados