Expressão de proteínas recombinantes dos vírus Dengue, Zika e Chikungunya para diagnóstico sorológico diferencial das viroses

• Autor(a) principal: Pereira, Aline Sanches
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-22052019-135544/
• topic: Arboviroses; Arboviruses; Diagnostic; Diagnóstico; Escherichia coli; Escherichia coli; Proteína recombinante; Recombinant protein

As arboviroses dengue, zika e chikungunya representam um sério problema de saúde pública no Brasil e no mundo. Elas circulam simultaneamente devido ao transmissor comum, vetores da classe Aedes, e são responsáveis por milhares de casos anuais no Brasil com consequências graves à população, levando à morte muitos indivíduos. Essas doenças possuem sintomas semelhantes, o que dificulta o diagnóstico clínico exato. O diagnóstico específico se mostra necessário para evitar o agravamento das consequências que cada uma pode trazer ao paciente. Os testes diagnósticos sorológicos disponíveis no mercado identificam uma única virose por vez. Os testes discriminatórios são, normalmente, moleculares utilizando PCR em tempo real. Tais métodos são excelentes, mas inadequados para o diagnóstico em massa devido ao custo. Devido a todos os riscos de morte ou de sequelas permanentes que esses vírus impõem aos indivíduos, um diagnóstico discriminatório se faz necessário e melhorias nos conjuntos diagnósticos são desejáveis.Os genes das proteínas ZIKVNS1, DENVNS1, DENVE3 e CHIKVE2 foram clonados com sucesso em diferentes linhagens de Escherichia coli, porém a proteína CHIKVE2 não foi expressa em nenhuma das linhagens. As proteínas ZIKVNS1, DENVNS1 e DENVE3 foram produzidas em bactérias da linhagem Rosetta(DE3) transformada com vetores pET28a recombinantes. Essas três proteínas foram solubilizadas dos corpos de inclusão, purificadas por cromatografia de afinidade ao níquel e identificadas pelas técnicas de SDS-PAGE e Western Blotting. A proteína DENVNS1 foi reconhecida em teste rápido comercial para detecção de antígenos NS1 da dengue o que confere a ela especificidade e grande potencial como antígeno de captura para diagnóstico. Neste trabalho foram produzidas as proteínas recombinantes DENVNS1, ZIKVNS1 e DENVE3 em E. coli. Este é o primeiro passo para produção de um dispositivo diagnóstico rápido, discriminatório, unificado, produzido com tecnologia nacional, reduzindo os gastos com a importação destes produtos e ampliando o alcance diagnóstico.