Efeito da aplicação da arginina sobre a composição e metabolismo de biofilmes microcosmos de saliva e prevenção da desmineralização do esmalte

• Autor(a) principal: Cusicanqui Mendez, Daniela Alejandra
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25145/tde-09062022-091229/
• topic: Arginina; Arginine; Biofilm; Biofilme; Cárie dentária; Dental caries; Enamel; Esmalte; Fluoreto; Fluoride

O objetivo do presente estudo in vitro foi determinar o efeito de duas diferentes concentrações da arginina (2,5% e 8%), associada ou não ao fluoreto de sódio a 1.450 ppm, sobre a composição e metabolismo de biofilmes microcosmos de saliva e prevenção e controle da desmineralização do esmalte dentário. Amostras de saliva provenientes de três adultos livres de cárie foram utilizadas como inóculos para a obtenção de um pool microbiológico que foi utilizado como estoque inicial para o crescimento de biofilmes microcosmos sobre blocos de esmalte bovino. O estudo foi dividido em três fases: i) determinação das condições de crescimento dos biofilmes microcosmos de saliva, ii) efeito da arginina combinada ou não ao fluoreto de sódio sobre o crescimento de biofilmes e iii) efeito do tratamento com arginina combinada ou não ao fluoreto de sódio sobre biofilmes crescidos por 3 dias. A composição e viabilidade dos biofilmes foram determinadas pela contagem de unidades formadoras de colônia de micro-organismos totais, estreptococos totais, estreptococos do grupo mutans e lactobacilos, crescidas sobre Agar Soja Triptona Sangue, Agar Mitis Salivarius, Agar Mitis Salivarius Sacarose Bacitracina e Agar Rogosa com ácido acético glacial a 0,13%, respectivamente. A vitalidade dos biofilmes intactos foi determinada por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). O metabolismo dos biofilmes foi determinado pela quantificação de polissacarídeos extracelulares insolúveis (AlexaFluor e CalcoFluor em MCVL), pela redução de resazurina (método colorimétrico) e concentração de L-lactato em meio de cultura (método de espectrofotometria enzimática). A desmineralização do esmalte foi determinada pela quantidade de cálcio liberado em meio de cultura por método Arsenazo III e perda mineral integrada e profundidade de lesão por microrradiografia transversal. As análises estatísticas foram realizadas pelos testes de Kruskal Wallis e post-hoc de Dunn (P<0,05). Os biofilmes crescidos em meio McBain suplementado com sacarose a 0,2% e PIPES a 25 mmol/L em anaerobiose apresentaram resultados adequados para ensaios laboratoriais com arginina, considerando a composição, a viabilidade e a vitalidade dos biofilmes, bem como a reprodutibilidade dos resultados. Observou-se efeito antibiofilme sinérgico da arginina e fluoreto de sódio pela redução da viabilidade, vitalidade e formação de polissacarídeos extracelulares de biofilmes que cresceram ou foram tratados pelos reagentes. Adicionalmente, o metabolismo de resazurina foi reduzido pelos reagentes em ambas as condições de crescimento e tratamento. Porém, a produção de ácido láctico foi significativamente reduzida apenas pelo tratamento com arginina a 8% e por ambas as combinações de arginina e NaF. A concentração de cálcio liberado em meio de cultura foi significativamente menor em todos os grupos de crescimento, exceto arginina a 2,5%, e nos grupos de tratamento com arginina a 8% e ambas as combinações com fluoreto de sódio. Entretanto, todos os demais parâmetros de desmineralização do esmalte foram similares entre todos os grupos. Portanto, os resultados do presente estudo demostraram um efeito sinérgico da combinação da arginina e do fluoreto de sódio sobre o crescimento e tratamento de biofilmes de microcosmos de saliva, reduzindo a viabilidade, vitalidade e metabolismo, desacelerando o processo de perda mineral mesmo em condições de alta disponibilidade de sacarose, contudo sem evitar o desenvolvimento de lesão no esmalte.