Construção de um vetor com o gene GFP de Aequorea victoria para a transformação de Saccharomyces cerevisiae

• Autor(a) principal: Gomes, Luiz Humberto
• Data de Publicação: 2000
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11138/tde-20191220-124312/
• topic: CONTAMINAÇÃO; EXPRESSÃO GÊNICA; FERMENTAÇÃO INDUSTRIAL; LEVEDURAS; MARCADOR MOLECULAR; PROTEÍNA VERDE FLUORESCENTE; VETOR PLASMIDIAL

Diversos métodos tem sido propostos para a identificação de leveduras contaminantes em processos fermentativos que utilizam leveduras da espécie Saccharomyces cerevisiae, mas nenhum deles oferece resultados absolutamente satisfatórios com a exatidão e precisão necessárias. Considerando que a identificação poderia ser facilitada com o uso de genes mercadores, foi construído um vetor plasmidial pYGFP3 com o gene da GFP (“green fluorescent protein”) extraída da Aequorea victoria, sob o controle do promotor de ADH2 (álcool desidrogenase II) de Saccharomyces cerevisiae o qual apresenta repressão por glicose. O vetor pYGFP3 foi utilizado para transformação de leveduras S. cerevisiae HD 93.15 D (MAT a, his 3, leu2, trpl, ura3) e X2904-3C (MATa, met1, trp1, ura3), que expressam o gene GFP3 somente em condições de baixo teor de glicose, não interferindo com outras funções metabólicas ou dispêndio de energia durante o processo fermentativo. Repicações sucessívas demonstraram a estabilidade do gene marcador nos transformantes, indicando que o método é viável para identificação simples e segura desta linhagem, podendo-se constituir em recurso adicional de identificação da levedura frente a outras contaminantes do processo fermentativo