Efeito do alendronato em lesões periapicais e avaliação da composição da microbiota bucal de ratas, em condições de hipoestrogenicidade

• Autor(a) principal: Pereira, Ana Patrícia de Sousa
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/58/58135/tde-09102019-131641/
• topic: Alendronate; Alendronato; Biologia molecular; Lesão periapical; Microbiota; Microbiota; Molecular biology; Osteoporose; Osteoporosis; Ovariectomia; Ovariectomy; Periapical lesions

Os objetivos desse estudo foram avaliar: o efeito do ALN no desenvolvimento de lesões periapicais (LP) induzidas em ratas ovariectomizadas (Capítulo 1); a influência da redução dos níveis de estrógeno na composição microbiana da cavidade bucal e consequentemente no desenvolvimento da lesão periapical (Capítulo 2). Para a realização do estudo do Capítulo 1, 25 ratas foram divididas em 3 grupos: sham (controle), ovariectomia (OVX), e OVX+ALN. Um dia após a realização da OVX, os animais do grupo OVX+ALN começaram a receber a medicação, via gavagem. Decorridas 9 semanas, os primeiros molares de todos os animais foram submetidos à indução de LP. Após 21 dias, foi realizada a eutanásia dos animais. Fêmures foram analisados para registro da densidade mineral óssea (BMD) e os blocos de tecido ósseo contendo os primeiros molares inferiores foram submetidos ao processamento histotécnico e à coloração com hematoxilina e eosina (HE) para análise da LP em microscopia convencional. Paralelamente, foi realizada a análise morfométrica da área das LP por imunofluorescência, histoenzimologia para a quantificação de osteoclastos e coloração de DAPI para quantificação de osteócitos apoptóticos. Além disso, os primeiros molares superiores foram utilizados para a análise da expressão gênica de citocinas pró-inflamatórias (IL-1&beta;, IL-6 e TNF-&alpha;) e marcadores da osteoclastogênese (RANKL/OPG). Já para a realização do estudo do Capítulo 2, 36 ratas foram divididas em 4 grupos: sham (controle), ovariectomia (OVX), sham + lesão periapical (Sham+LP) e ovariectomia + lesão periapical (OVX+LP). A indução da LP também ocorreu após 9 semanas seguindo o mesmo protocolo descrito acima. Após o período experimental de 21 dias, foi realizada a colheita microbiológica da cavidade bucal dos animais, por meio de esfregaço com microbrush nas regiões de bochechas, assoalho bucal e língua e posteriormente os animais foram submetidos à eutanásia. As amostras foram analisadas pelo método Checkerboard DNA-DNA Hybridization, para verificar a presença de 40 espécies bacterianas as quais foram divididas em complexos microbianos de Socransky. A análise da área das lesões periapicais foi realizada por microscopia de flourescência. Os resultados foram submetidos aos testes ANOVA e Kruskal-Wallis e aos pós-testes de Tukey e Dunn, com nível de significância de 5%. A análise dos resultados do Capítulo 1 permitiu evidenciar que a OVX reduziu a BMD do fêmur e o tratamento com ALN foi capaz de prevenir a perda óssea (p<0,001). Com relação à análise microscópica da região periapical, em HE, os grupos sham e OVX+ALN apresentaram ligamento periodontal e infiltrado inflamatório moderadamente aumentados, enquanto o grupo OVX apresentou esses parâmetros intensamente aumentados. As lesões periapicais do grupo OVX foram significantemente maiores, em comparação aos demais grupos (p<0,001). O grupo OVX apresentou a maior quantidade de osteócitos apoptóticos e o ALN foi capaz de prevenir a apoptose dessas células, além de reduzir significantemente a expressão de IL-6 (p<0,05). A OVX e o ALN não tiveram efeito na expressão de RANKL/OPG e não influenciaram no número de osteoclastos ao redor da LP (p>0,05). Já a análise dos resultados do Capítulo 2 permitiu evidenciar que a microbiota bucal foi alterada em condições de deficiência de estrógeno. Os grupos OVX apresentaram maior quantidade de bactérias, em comparação ao grupo SHAM, na maioria dos complexos microbianos (p<0,001), com exceção dos complexos roxo e amarelo, nos quais esse aumento numérico não foi estatisticamente significante, e do verde, que apresentou uma distribuição mais homogênea entre os grupos (p>0,05). Os animais do grupo controle (com ou sem lesão), sem considerar a influência da deficiência de estrógeno, não apresentaram diferença estatisticamente significante (p>0,001) em nenhum dos complexos microbianos. As lesões periapicais nos animais OVX apresentaram-se significativamente maiores em comparação aos animais SHAM (p<0,001). Pode-se concluir que a condição hipoestrogênica induzida pela OVX agravou a reabsorção óssea, induzindo a morte de osteócitos e estimulando LP maiores. O tratamento com ALN reduziu a apoptose de osteócitos e a inflamação, reduzindo a reabsorção óssea em LP de ratas ovariectomizadas. Com relação à microbiota bucal, a condição de hipoestrogenicidade aumentou a quantidade de bactérias e alterou o perfil microbiano na saliva, influenciando na progressão de lesões periapicais.