Plasticidade dos neutrófilos durante a infecção por Mycobacterium tuberculosis está relacionada com a progressão da doença humana

• Autor(a) principal: Silva, Priscilla Mariane Cardoso
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-07082017-111649/
• topic: Mycobacterium tuberculosis; Mycobacterium tuberculosis; Neutrófilos; Neutrophils; Plasticidade; Plasticity; Tuberculose; Tuberculosis

A tuberculose é uma doença infecciosa, causada pela Mycobacterium tuberculosis (Mtb), que afeta um terço da população mundial, sendo que o hospedeiro infectado pode desenvolver tanto a forma ativa quanto latente da infecção. Juntamente com os macrófagos residentes, os neutrófilos parecem ser importantes no controle da infecção por Mtb e formação de granulomas no pulmão. Recentemente, alguns estudos estão quebrando paradigmas sobre os neutrófilos, revelando que em algumas situações como em câncer, essas células podem ser polarizadas para os perfis N1 e N2, associados respectivamente às respostas anti-tumoral e pró-tumoral. Estas descobertas abriram uma perspectiva diferente no estudo de infecções, inclusive na tuberculose. Assim, a hipótese deste trabalho é que a polarização dos neutrófilos nos perfis N1 e N2 pode influenciar o controle da infecção por Mtb, e portanto nosso objetivo foi avaliar como estes diferentes perfis estão relacionados com a patogênese da doença humana. Os neutrófilos foram isolados a partir de sangue periférico de 17 voluntários que não apresentavam a infecção ativa por Mtb. Estas células foram polarizadas in vitro com GM-CSF + IFN-γ para diferenciação no perfil N1 ou com IL-4 + IL-13 + TGF-β para diferenciação no perfil N2. Os neutrófilos polarizados foram caracterizadas por análise morfológica, produção de espécies reativas de oxigênio e expressão gênica. Neutrófilos N1 e N2 foram então infectados in vitro por Mtb e a capacidade fagocítica e microbicida, bem como a liberação de NETs e a produção de citocinas foram analisadas. Os neutrófilos de pacientes com tuberculose ativa foram avaliados quanto a expressão de genes correlacionados aos perfis N1 e N2 e estabelecidas correlações com a gravidade da doença. Quando os neutrófilos foram desafiados com Mtb, o perfil N1 apresenta aumento de IL-8, IL-1-β, IFN-γ e a formação de NETs. Em contraste, o perfil de N2 apresentou menor produção destas citocinas inflamatórias, mas de forma evidente, aumento de IL-4 e TGF-β. Além disso, na condição N2 não foi possível observar a formação de NETs. Curiosamente, avaliando a atividade microbicida, quando os neutrófilos são polarizados, infectados por Mtb e co-cultivados com PBMC, os mediadores liberados por N1 e N2 potencializam a capacidade dos monócitos em eliminar a micobactéria. Adicionalmente, neutrófilos de 19 pacientes com tuberculose ativa foram avaliados quanto a expressão gênica, e comparadas à expressão dos neutrófilos de indivíduos não infectados. A expressão dos genes TLR4, LCN2 e Dectin1 estava diminuída em neutrófilos de pacientes com tuberculose e expressão do gene CCR7 foi correlacionada negativamente com a progressão da tuberculose, de modo que a maior expressão de CCR7 está relacionada à menor gravidade da doença. A expressão gênica também mostrou diferenças no perfil dos neutrófilos durante as distintas fases de ativação por Mtb. Este resultado reforça a ideia de plasticidade dos neutrófilos de acordo com o microambiente e ajuda a entender melhor como os subtipos de neutrófilos podem ter diferentes ações contra Mtb. Além disso, indica que os N2 estão mais relacionados com a doença na sua fase mais grave, impedindo a resolução ideal da infecção que estaria associada ao perfil N1.