Atividade anti-Trypanosoma cruzi de derivados do 5-nitrofurano e algumas características de seu modo de ação.

• Autor(a) principal: Santos, Mariana Bury da Silva
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-10032023-170640/
• topic: Activation by mitochondrial nitroreductase; Ativação por nitroredutase mitocondrial; Derivados de Nifuroxazida; DNA breaks; Efeito tripanocida; Entrada por difusão passiva; Entry by passive diffusion; Nifuroxazide derivatives; Quebras no DNA; Trypanocidal effect

A busca de novos compostos para o tratamento da doença de Chagas é uma prioridade de pesquisa. Neste estudo, investigamos a atividade de derivados do 5-nitrofurano, cuja síntese se baseou em modificações moleculares do fármaco Nifuroxazida (NF), sobre formas epimastigotas das cepas Silvio X10 cl1 e Colombiana de Trypanosoma cruzi, ambas isoladas de casos humanos e pertencentes à DTU TcI. A cepa Colombiana foi escolhida por apresentar resistência a Benznidazol (BZ) e a Nifurtimox (NFX), únicos fármacos disponíveis para o tratamento da doença de Chagas. Inicialmente investigamos a influência da composição do meio de cultura na atividade de dois derivados de NF, um com comprovada atividade anti-T. cruzi e outro inativo. Utilizando duas formulações do meio LIT e o meio Grace, verificamos que nos três meios a atividade diferencial dos compostos se mantém. Para o composto com atividade tripanocida, os valores de CI50 nos meios LIT não apresentam diferenças consideráveis. No entanto, no meio Grace a sensibilidade das cepas foi 30% maior. Avaliamos o efeito de sete derivados de NF, usando como controles BZ e NFX. Verificamos que todos os derivados apresentam atividade tripanocida maior que BZ e quatro deles, maior que NFX. Concluímos não haver diferenças de sensibilidade nas duas cepas analisadas. Os derivados apresentam baixa citotoxicidade para as células LLC-MK2. Verificamos que alguns derivados de NF promovem a mortalidade de ~99% dos tripomastigotas, após incubação por 20 h a 37 °C, ao passo que a mortalidade provocada por NFX, no mesmo período de observação, é de apenas 7,3 %. Outro objetivo contemplado em nosso projeto foi o de determinar algumas características relacionadas ao modo de ação de cinco derivados de NF, um com baixa (c1) e os demais com elevada atividade tripanocida (c5, c15, c19 e c20), aferida a partir dos valores de CI50. Os valores de ClogP indicam que os compostos c15, c19 e c20 são mais hidrofóbicos, tendo maior capacidade de atravessar membranas biológicas. A primeira característica investigada foi a capacidade de os derivados de NF serem ativados pela nitroredutase mitocondrial de tipo I de T. cruzi (TcNTR), de putativa origem bacteriana. Concluímos que a TcNTR é capaz de ativar in vitro os derivados de NF. Verificamos que a entrada dos compostos no parasito ocorre por difusão passiva ou por difusão facilitada mediada por receptor não dependente de ATP. Concluímos que o efeito tripanocida dos derivados não depende de um ciclo redox, uma vez que os compostos não promovem o aumento do consumo de oxigênio mitocondrial, nem induzem a produção de peróxido de hidrogênio (H2O2). Além disto, nossos resultados apoiam observações anteriores que indicam que NFX não atuaria via ciclo redox. Demonstramos que os derivados de NF induzem extensas quebras no DNA, análogas àquelas produzidas por BZ.