Avaliação do perfil fenotípico, proliferativo e secretório de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo captadas por lipoaspiração assistida por laser

• Autor(a) principal: Melo, Lucas da Ponte
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5140/tde-04082023-145119/
• topic: Cartilage articular.; Cartilagem articular; Cell cycle; Cell plasticity; Cell- and tissue-based therapy; Células-tronco mesenquimais; Ciclo celular; Citocinas; Cytokines; Expressão gênica; Gene expression; Lipectomia; Lipectomy; Mesenchymal stem cells; Plasticidade celular; Terapia baseada em transplante de células e tecidos

Introdução: as dificuldades relacionadas ao processo de reparo/cicatrização de lesões da cartilagem articular são um desafio terapêutico. A aplicação de técnicas de terapia celular vem ganhando espaço nos processos de reparo da cartilagem. Nesse contexto, as células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (CTM-TA) são uma promissora fonte de células para fins de terapia celular. A fotoestimulação seletiva do tecido adiposo, decorrente da aplicação de um laser com comprimento de onda específico para o tecido adiposo (1210 nm) durante o procedimento de lipoaspiração, pode permitir a captação de CTM-TA sem a utilização de digestão enzimática, diminuindo o tempo e a manipulação durante o processamento. O objetivo deste trabalho é caracterizar as células captadas pela lipoaspiração assistida por laser com fotoestimulação seletiva do tecido adiposo como CTM-TA e comparar o seu potencial de diferenciação/plasticidade, proliferação celular e expressão de citocinas com as CTM-TA obtidas por lipoaspiração convencional. Métodos: foi realizada a captação de tecido adiposo em oito (n = 8) doadores voluntários, seguido de processamento para obtenção de CTM-TA. As amostras foram obtidas e processadas seguindo as técnicas de lipoaspiração convencional (n = 4) e lipoaspiração assistida por laser (n = 4). As células foram caracterizadas como CTM-TA através da imunofenotipagem por citometria de fluxo e diferenciação em linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica. Foi realizada a análise da expressão gênica dos marcadores de diferenciação celular e de progressão do ciclo celular através da reação em cadeia de polimerase em tempo real, além do estudo do ciclo celular destas CTM-TA. O array de citocinas foi aplicado para análise semiquantitativa do perfil secretório destas CTM-TA. Resultados: na imunofenotipagem, as CTM-TA de ambos os grupos expressaram (positividade > 95%) os marcadores mesenquimais CD29, CD90 e CD105, além da expressão abaixo de 5% dos marcadores hematopoiéticos CD14, CD34, CD45, CD80, CD117 e HLA-DR. Verificou-se a capacidade de diferenciação multipotente das CTM-TA em três tipos celulares: adipócitos, osteoblastos e condroblastos. Na expressão dos genes ALPL (fosfatase alcalina), RUNX2, osteocalcina, osteopontina, PPAR, CEBP, sidercano e perlecano, envolvidos na diferenciação e plasticidade celular, houve aumento de expressão significativo apenas do ALPL (p = 0,004) no grupo lipoaspiração convencional. Na análise do ciclo celular, o grupo lipoaspiração assistida por laser com fotoestimulação seletiva do tecido adiposo apresentou menor atividade celular na fase G0/G1 (p = 0,0078) e aumento de atividade na fase S (p = 0,0045), sem diferença no tempo de duplicação entre os grupos. Não houve diferença significativa na expressão de proteínas envolvidas na progressão do ciclo celular entre os grupos. No array de citocinas, houve a expressão das citocinas IL-6 (p = 0.07), SDF-1/CXCL-12 (p = 0,49) e Serpin E1/PAI-1 (p = 0,22) em ambos os grupos, sem diferença na análise semiquantitativa de expressão entre os grupos. Conclusão: de acordo com os resultados, pode-se concluir que as CTM-TA obtidas através da lipoaspiração assistida por laser com fotoestimulação seletiva do tecido adiposo são, de fato, CTM. Através da comparação do potencial de diferenciação/plasticidade, da proliferação celular e da expressão de citocinas, concluímos também que as CTM-TA captadas pela lipoaspiração assistida por laser com fotoestimulação seletiva do tecido adiposo são tão boas e de baixo risco tumorigênico, para fins de aplicação em terapia celular, quanto as obtidas por lipoaspiração convencional