Efeito da suplementação de esfingosina-1-fosfato durante cultivo embrionário sobre a diferenciação do trofectoderma em embriões bovinos

• Autor(a) principal: Berling, Francieli Perroni
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-14082024-095613/
• topic: Blastocisto; Blastocyst; Glicose; Glucose; In vitro production; Inner cell mass; Massa celular interna; Produção in vitro

O desenvolvimento inicial do embrião é marcado pelo primeiro evento de diferenciação celular que define massa celular interna (MCI) e trofectoderma (TE). Em camundongos, a glicose (GLC) é essencial para esse processo e a tensão de oxigênio (O2) também interfere na formação de TE e ainda, há evidências em embriões e em células cultivadas de que a esfingosina-1-fosfato (S1P) pode regular as vias envolvidas neste evento. Nossa hipótese é que a glicose é necessária, a maior tensão de O2 é prejudicial para a diferenciação do TE e que o S1P induz a diferenciação do TE em embriões bovinos produzidos in vitro. Este estudo teve dois objetivos relatados em dois capítulos: 1. Avaliar o efeito da presença (+GLC) ou ausência (-GLC) de GLC em diferentes níveis de O2 (5% ou 20%) na formação do TE em embriões bovinos; 2. Estudar o papel da estimulação S1P na diferenciação de TE adicionando S1P ou o inibidor do receptor S1P, JTE-013. Inicialmente, os embriões foram submetidos aleatoriamente aos tratamentos no dia 1, em delineamento fatorial 2x2, considerando GLC (presente/ausente) e O2 (baixa/alta tensão). No segundo capítulo, usou-se apenas o modelo sem GLC em dois experimentos diferentes. O primeiro experimento consistiu no tratamento com S1P, enquanto o segundo visou a inibição da via com tratamento com JTE-013. As taxas de formação de blastocistos e os blastocistos foram obtidos 180 horas pós-inseminação. Realizou-se para todos os experimentos contagens de células totais, TE (GATA3-positivas) e MCI (GATA3-negativas), bem como análise de qRT-PCR para GATA3, YAP1, SOX2, CDX2, TFAP2C e OCT4. As taxas e contagens de células foram analisadas por ANOVA, enquanto para qRT-PCR foi considerado um modelo linear misto. No primeiro estudo, houve efeito do O2 nas taxas de clivagem, mas não na taxa de blastocistos. Houve interação entre GLC e O2 na contagem de células da MCI, expressão de CDX2 e expressão de SOX2. No segundo capítulo, houve um aumento na taxa de desenvolvimento causada por S1P em comparação ao controle e NaOH, embora não houve alterações induzidas por JTE-013. Células totais e células da MCI estavam aumentadas no grupo S1P em relação ao controle e NaOH. A expressão de CDX2 aumentou nos grupos S1P e NaOH, enquanto TFAP2C diminuiu no grupo S1P. A adição do JTE-013 não interferiu na expressão gênica ou contagem celular. Em conclusão, a diferenciação de TE ocorreu em ausência de glicose e, curiosamente, esta condição aumentou a expressão do gene relacionado ao TE CDX2 quando em maior tensão de O2. Ainda, S1P não modulou positivamente a diferenciação do TE, apesar de aumentar CDX2, mas induziu aumento no número total de células e no número de células MCI, sugerindo uma ação diferente da S1P em embriões bovinos.