O papel funcional do miR-155 no controle pós-transcricional de mRNAs envolvidos no desenvolvimento de timócitos

• Autor(a) principal: Felício, Rafaela de Freitas Martins
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-06062017-160544/
• topic: Desenvolvimento de timócito; Development thymocyte; electro-transfection and Anti-miR-155; eletrotransfecção e AntimiR-155; miR-155; miR-155

O timo é um órgão linfóide primário, responsável pela indução da tolerância imunológica central. Histologicamente esse órgão é formado por um estroma composto por células tímicas epiteliais (TECs) além de outros tipos celulares. Dentre as TECs encontramos as células tímicas epiteliais corticais (cTECs) e as células tímicas epiteliais medulares (mTECs), as quais são responsáveis pela seleção positiva e seleção negativa dos timócitos em desenvolvimento, respectivamente. Durante seu desenvolvimento intra-tímico, os timócitos modulam da expressão de genes de marcadores de diferenciação, os chamados clusters de diferenciação (CDs) além de outros genes. Neste projeto nós nos interessamos por este aspecto, ou seja, o controle da expressão gênica durante a diferenciação dos timócitos. Como os microRNAs (miRNAs) são elementos essenciais de controle fino da expressão gênica, atuando ao nível pós-transcricional de RNAs mensageiros (mRNAs) de células eucarióticas, nosso interesse foi o de estudar este tipo de controle em timócitos. Dentre as centenas de miRNAs já descritos no camundongo, o miRNA 155 (miR-155) é o mais expresso no timo e no baço sendo que seu papel foi já foi demonstrado em células T maduras periféricas, mas ainda não se estudou seu possível papel em timócitos em desenvolvimento. A partir das evidências do papel do miR-155 nas células T maduras, nós elaboramos a hipótese de que esse miRNA também atua no desenvolvimento de timócitos. Para testar essa hipótese, nós utilizamos a estratégia de silenciamento do miR-155 por meio de eletroporação (eletrotransfecção) do antagonista Anti-miR-155 diretamente no timo de camundongos BALB/c. Os timócitos de camundongos controle e silenciados foram então separados por citometria de fluxo e amostras de RNA dessas células foram então analisadas por meio de qRT-PCR para nos certificarmos da eficiência do silenciamento do miR-155 e por hibridizações com microarrays de mRNAs para a análise do transcriptoma. Observamos que o silenciamento do miR-155 provoca a modulação de um grande conjunto de mRNAs, os quais foram analisados com auxílio do banco de dados do \"Immunogical Genome Project\" (ImmGen) quanto aos seus aspectos funcionais focando no desenvolvimento de timócitos. Os mRNAs modulados e envolvidos neste processo, foram ainda reanalisados quanto sua capacidade de interagir por hibridização com o miR-155 (hibridização miRNA-mRNA) por meio da ferramenta computacional RNA-Hybrid. Por meio destas estratégias, conseguimos repertoriar um conjunto de mRNAs que codificam proteínas importantes para o desenvolvimento de timócitos e que são potencialmente controlados por miR-155.