Desenvolvimento de biossensor para detecção de nematoides parasitas de plantas

• Autor(a) principal: Nascimento, Isabella Sampaio do
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-27052020-111132/
• topic: Biosensor; Biossensor; Detecção de nematoides; Nematode detection; Nematoides parasitas de plantas; Plant-parasitic nematode

Nematoides parasitas de plantas são microrganismos patogênicos que infectam uma grande variedade de culturas, causando baixa produtividade na plantação e perdas econômicas significativas. A detecção e identificação das espécies é importante para que se escolha a técnica de manejo mais adequada e para que não seja necessário aplicar uma grande quantidade de pesticida. Atualmente, a identificação dos nematoides é feita com base nas características morfométricas observadas por microscopia ou por análise genética através de amplificação por PCR e eletroforese. No entanto, pessoas especializadas e equipamentos de alto custo são requeridos para a realização dessas técnicas. Esse trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de dois biossensores para detecção de nematoides parasitas de plantas: um genossensor eletroquímico e um imunossensor elétrico. Foram selecionadas três espécies mais importantes economicamente: Meloidogyne incognita, Meloidogyne javanica e Pratylenchus brachyurus. Para o genossensor, projetou-se as sequências de DNA e para o imunossensor, foram extraídas as proteínas dos indivíduos de cada espécie e produzidos anticorpos policlonais. Eletrodos de ouro descartáveis do tipo multiplex e interdigitados foram desenvolvidos e fabricados para a construção dos biossensores. As caracterizações eletroanalíticas por espectroscopia de impedância eletroquímica e voltametria cíclica mostraram que o genossensor para detecção de sequências de DNA da espécie M. incógnita foi capaz de diferenciá-las de sequências da espécie M. javanica, pertencente ao mesmo gênero. Para o imunossensor, as medidas de impedância elétrica e análise estatística por PCA também apresentaram seletividade. Uma curva de calibração em função da concentração da proteína dos nematoides foi construída, exibindo um limite de detecção de 28,8 ± 3,2 ng/mL. Os biossensores desenvolvidos representam uma alternativa rápida, sensível e de baixo custo para a detecção e identificação de nematoides, destacando a portabilidade e possibilidade de medidas point-of-care do imunossensor elétrico.