Clonagem de um alelo do gene SPT15 em Saccharomyces cerevisiae para aumento da produção de etanol.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Dalmolin, Keina Poliana Pivarro
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-15092011-142026/
Resumo: Alper e colaboradores demonstraram que a linhagem BY4741 recombinante portadora de cópias adicionais de um alelo SPT15 mutagenizado em três diferentes posições (spt15-300) utiliza mais rapidamente a glicose e aumenta a produção de etanol. Neste trabalho, foi realizada a clonagem deste alelo, aqui chamado spt15*. Inicialmente o DNA genômico da linhagem S. cerevisiae S288C foi utilizado como molde para amplificação por SOEing-PCR. O alelo spt15* foi clonado no plasmídeo pGEMT-Easy e, em seguida, introduzido no plasmídeo epissomal pMA91. Após construções moleculares, foi obtido o fragmento de DNA dpPGKspt15*tPGKd, empregado na transformação genética, da linhagem S. cerevisiae YPH252, por d-integração. Os clones recombinantes YHP252/pMA91spt15* e YHP252/dpPGKspt15*tPGKd consomem mais eficientemente a glicose e aumentam a produção de etanol. O seqüenciamento do alelo SPT15 da levedura industrial PE-2 revelou 100% de identidade com o alelo das linhagens BY4741 e S288C, criando ótimas perspectivas para trabalhos futuros.
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