Avaliação da suscetibilidade antimicrobiana de isolados de Nocardia spp. por microdiluição em caldo com o uso de resazurina e espectrofotometria

• Autor(a) principal: Coelho, Vivian Caso
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5134/tde-05042022-160637/
• topic: Antimicrobial susceptibility testing; Broth microdilution; Espectrofotometria; Microdiluição em caldo; Nocardia; Nocardia; Resazurin; Resazurina; Spectrophotometry; Testes de sensibilidade microbiana

O gênero Nocardia sp. compreende um amplo grupo de bactérias que podem ser encontradas no solo, matéria orgânica, água fresca e salgada. A nocardiose, doença causada por microrganismos desse gênero, é especialmente grave em pacientes imunodeprimidos que podem apresentar abscessos cerebrais e septicemia. Os sinais clínicos são muitas vezes similares aos de outras infecções, podendo levar ao tratamento inadequado e à consequente disseminação sistêmica. Dessa forma, a identificação correta das espécies de Nocardia e o estudo da suscetibilidade antimicrobiana é subsídio para o tratamento dos pacientes. Entre os testes de suscetibilidade, destaca-se a microdiluição em caldo que determina a Concentração Inibitória Mínima (CIM) de um antimicrobiano necessária para conter o crescimento de microrganismos. No entanto, há relatos na literatura de subjetividade na visualização e interpretação dos resultados desse teste com Nocardia spp. Assim, como tentativa de reduzir a subjetividade na interpretação, o presente estudo avaliou duas formas alternativas de leitura de resultados dos ensaios de microdiluição em caldo com isolados de Nocardia spp., uma empregando o sal de resazurina e outra com a leitura das densidades ópticas por espectrofotometria, e comparou-as com a leitura Visual Padrão Ouro. Para tanto, inóculos de cepas de bactérias de referência e de quinze isolados clínicos de Nocardia spp. foram incubados com os antimicrobianos Amicacina, Ciprofloxacina, Minociclina e Trimetoprima-Sulfametoxazol (TMP-SMX), diluídos previamente em microplacas de 96 poços. Paralelamente, duas microplacas por antimicrobiano foram inoculadas com as bactérias de forma idêntica, porém, uma recebeu resazurina. Foram então realizadas as leituras das CIMs: Visual sem resazurina (VPO; método Padrão Ouro), Visual com Resazurina (VRE), e leitura das densidades ópticas em espectrofotômetro (ESP). Os percentuais das concordâncias numérica (valor das CIMs) e categórica (classificação em suscetível, resistência intermediária ou resistente) foram calculados intra-leituras (mesmo tipo de leitura, em dias diferentes) e inter-leituras (entre as três diferentes leituras, ensaios paralelos). Na análise geral das médias dos percentuais de concordância das leituras com Amicacina, a VPO demonstrou 100,0% de concordância categórica e, também foi 100,0% concordante com VRE e com ESP. Com Ciprofloxacina, as concordâncias categóricas intra-leituras foram em média 82,9%. Observou-se 88,0 e 91,5% na análise categórica de VPO e ESP, respectivamente, com Minociclina e, quando comparadas entre si, 87,7%. Percentuais acima de 91% também foram observados nas análises categóricas com TMP-SMX, sendo 95,5% na VPO, 99,2% em ESP, e 91,7% quando essas leituras foram comparadas entre si. Os métodos alternativos, uso da resazurina e do espectrofotômetro, demonstraram altos percentuais de concordância com a leitura padrão ouro, sugerindo o uso desses métodos, em laboratórios de rotina, na avaliação da suscetibilidade de isolados de Nocardia spp. a antimicrobianos