Uso de MALDI-TOF MS para tipagem de Streptococcus agalactiae isolados de mastite bovina e bubalina

• Autor(a) principal: Pereira, Lígia Beatriz Rizzanti
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10135/tde-18072024-115023/
• topic: Antimicrobials; Antimicrobianos; MALDI-TOF MS; MALDI-TOF MS; RAPD; RAPD

Streptococcus agalactiae é um dos principais patógenos causadores de mastite subclínica em rebanhos leiteiros. O correto diagnóstico e a caracterização de Streptococcus agalactiae são cruciais para tomada de decisão devido ao perfil de transmissão contagiosa desse agente. A metodologia de Espectrometria de massa por ionização e dessorção a laser assistida por matriz através do tempo de voo (MALDI-TOF MS) tem sido usada para identificação dos patógenos causadores de mastite, mas poucos estudos avaliaram a eficácia dessa metodologia para agrupamento de patógenos causadores de mastite. Este estudo teve como objetivo avaliar o uso de MALDI-TOF MS para agrupamento de Streptococcus agalactiae isolados de mastite subclínica bovina e bubalina em nível de proteína ribossomal e avaliar o perfil de sensibilidade de Streptococcus agalactiae aos antimicrobianos. Amostras de leite (n =835) de 3 rebanhos (bovino = 2; e bubalino = 1) foram coletadas e submetidas à cultura microbiológica e MALDI-TOF MS para identificação de Streptococcus agalactiae. Um total de 198 amostras de leite foram identificadas com Streptococcus agalactiae (fazenda A = 67 isolados de vacas, fazenda B = 101 isolados de vacas, fazenda C = 30, isolado de búfalas). Os isolados foram submetidos a análise de sensibilidade aos antimicrobianos em que foi realizada a metodologia de concentração inibitória mínima para 10 antimicrobianos (penicilina, cefoxitina, ceftiofur, gentamicina, oxacilina, tetraciclina, cefalexina, amoxicilina, enrofloxacina, cefquinoma). Os resultados da CIM mostraram alta sensibilidade (> 90%) para ceftiofur, penicilina, oxacilina, amoxicilina, cefquinoma, gentamicina e cefoxitina e baixa sensibilidade (< 15%) para enrofloxacina e cefalexina. Para o agrupamento de isolados foi realizada a análise de Amplificação aleatória de DNA polimórfico (RAPD), que foi utilizado como método padrão ouro para comparação do dendrograma por MALDI-TOF MS. O agrupamento por MALDI-TOF MS resultou em 8 diferentes clusters, enquanto o RAPD obteve 33 clusters diferentes com similaridade de ≥80%. O MALDI-TOF agrupou todos os isolados avaliados, já o RAPD agrupou somente 100 isolados em clusters. Ambos os métodos apresentaram clusters com isolados do mesmo rebanho e com perfil de sensibilidades similares. Foi observado que no RAPD somente 5 clusters agruparam isolados com o mesmo perfil de sensibilidade, enquanto o MALDI-TO MS não apresentou nenhum cluster com todos os isolados de mesmo perfil de sensibilidade. É possível observar que nos clusters VI, VII e VIII, do MALDI-TOF MS todos os isolados são resistentes a enrofloxacina, e que o cluster VI (73,46%, n = 36/49) apresentou o maior número de isolados sensíveis a tetraciclina. Conclui-se que o MALDI-TOF MS pode ser uma ferramenta para rápido estudo epidemiológico, mas não substitui a método convencional de agrupamento genotípica, uma vez que o MALDI-TOF utiliza a proteína ribossomal e a distância espectral como método de similaridade entre os isolados mais isolados precisam ser estudados para comprovar a acurácia do MALDI- TOF MS como ferramenta de estudo epidemiológico.