Detecção e caracterização de lipídios nitrados no plasma e nas lipoproteínas humanas

• Autor(a) principal: Lima, Émersom Silva
• Data de Publicação: 2003
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-25082022-091710/
• topic: Bioquímica clínica; Bioquímica clínica; Lipídeos (Metabolismo; Determinação); Lipídeos (Metabolismo; Determinação); Lipoproteínas (Metabolismo); Lipoproteínas (Metabolismo)

O óxido nítrico (•NO) e outras espécies reativas do nitrogênio reagem com radicais lipídicos gerando lipídios nitrados (LNs) aos quais têm sido atribuídas diversas ações antiaterogênicas. Contudo, apesar de diversos estudos terem demonstrado a formação de LNs em sistemas isolados, até então, a detecção destes produtos em amostras humanas não havia sido descrita. No presente trabalho foram realizadas a síntese, a caracterização química, a detecção em plasma e lipoproteínas humanas e a avaliação da atividade de liberação de •NO; do nitrolinoleato (LNO2), nitrohidroxilinoleato (LNO2OH) e nitrolinoleato de colesterol (ChLNO2), derivados do ácido linoleico, seu hidroperóxido e do linoleato de colesterol, respectivamente. Os LNs foram sintetizados in vitro, purificados com cromatografia em coluna ou cromatografia de camada delgada e caracterizados por cromatografia liquida acoplada à espectrometria de massa seqüencial com ionização por eletrospray (LC-ESI/MS/MS), espectroscopia de infravermelho e ressonância magnética nuclear. Os LNs foram detectados no plasma e nas lipoproteínas por LC-ESI/MS/MS. A liberação de •NO pelos produtos sintetizados foi confirmada pela análise direta do •NO por quimiluminescência; por ressonancia paramagnética eletrônica (RPE), através da análise do complexo formado pela reação do •NO liberado com spin traps (Fe-MGD2, Carboxi-PTIO e DBNBS) e pelo efeito do vasorelaxamento em anéis aórticas de ratos. As análises quantitativas demostraram a presença de níveis mais elevados de LNO2 e LNO2OH no plasma de indivíduos hiperlipidêmicos em relação a normolipidêmicos, detectando-se também ChLNO2 no plasma e nas frações lipoproteicas de indivíduos normolipidêmicos. Os produtos sintetizados liberaram ·No detectado por quimiluminescência, resultado que foi confirmado pelos experimentos de RPE. Os lipídios nitrados também induziram relaxamento independente do endotélio, o qual foi inibido pela presença de ODQ, um inibidor da guanilato ciclase solúvel. A presença de LNs foi então pela primeira vez descrita em plasma e nas lipoproteínas humanas. Estes achados podem tanto comprovar o papel antioxidante do •NO in vivo e/ou representar um mecanismo compensatório de proteção durante o estresse nitrativo/oxidativo presente nas hiperlipidemias.