Obtenção da co-chaperona mitocondrial hDjC20 humana

• Autor(a) principal: Pereira, Arthur Alexandre
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-17022020-141644/
• topic: chaperona molecular; DjC20; DjC20; Hsp70; Hsp70; J-protein; molecular chaperone; protein J

A estrutura nativa de uma proteína é essencial para o correto funcionamento e em ambiente celular, essa estrutura é adquirida durante um processo denominado de enovelamento proteico. Contudo, falhas durante o enovelamento da proteína podem ocorrer, levando a formação de agregados, que apresentam relação com o surgimento de algumas doenças. Para contornar esse problema a evolução desenvolveu uma maquinaria celular para auxiliar as proteínas nascentes ou mal enoveladas a adquirirem a estrutura nativa. As chaperonas moleculares são um grupo de proteínas que estão envolvidas em diversos processos, como no enovelamento de proteínas nascentes ou mal enoveladas, na prevenção da agregação proteica, no encaminhamento de proteínas agregadas para o processo de degradação, entre outros. As Hsp70, sendo uma das principais famílias de chaperonas moleculares, têm participação em vários desses processos celulares e necessitam de auxílio de cofatores e co-chaperonas para a realização do seu ciclo funcional. A elucidação do mecanismo e a interação dos fatores presentes se fazem necessário para o entendimento do seu ciclo funcional. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de uma co-chaperona das Hsp70, de origem humana, pertencente à família das J-proteins, conhecida por atuar na mitocôndria. A proteína recombinante hDjC20 humana (hDjC20) foi expressa sem o peptídeo sinal de encaminhamento para a mitocôndria, purificada e submetida a caracterização biofísica inicial utilizando as técnicas de dicroísmo circular (CD), fluorescência intrínseca do triptofano, cromatografia de exclusão por tamanho analítica (aSEC) e calorimetria de varredura diferencial (DSC). Os resultados indicam que a hDjC20 recombinante foi obtida com um alto grau de pureza, enovelada e monomérica em solução. Testes de desnaturação química e térmica indicam que a hDjC20, que tem um domínio zinc-finger, se apresenta provavelmente ligada ao zinco que contribui para a estabilidade estrutural da proteína.