Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Marco, Ricardo de
Data de Publicação: 2003
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-10052018-143753/
Resumo: Este trabalho demonstrou a construção de minibibliotecas de \"Expressed Sequence Tags\" (EST) com o uso de RT-PCR de baixa estringencia e \"primer\" consenso-degenerado. Através do estudo de parâmetros críticos como concentração de sais, temperatura e velocidade de ciclagem, composição dos \"primers\" e qualidade do RNA mensageiro, foi possível padronizar um protocolo. Tal protocolo permitiu um aumento do numero de seqüências por minibiblioteca em relação a protocolos similares existentes na literatura (Dias neto et al., 1997 e 2000) sem perda de características desejáveis como amplificação preferencial do centro dos genes e nomalização das mensagens. As seqüências produzidas levaram a um significativo aumento das seqüências de EST de S. mansoni disponíveis publicamente e permitiu a detecção da existência de novos fragmentos de genes expressos na fase adulta do parasita. Neste trabalho também clonamos uma apirase de S. mansoni cuja a seqüência não havia sido descrita anteriormente. O gene possui cerca de 2,7 mil pares de bases e codifica para uma proteína de 544 aminoácidos. Esta foi expressa em sistema heterologo e utilizada para obtenção de anticorpos policlonais contra esta proteína. Utilizando estes anticorpos foi possível detectar a proteína no tegumento do parasita.
id USP_ceefa4867446fcf612ae0f6ade9e7db9
oai_identifier_str oai:teses.usp.br:tde-10052018-143753
network_acronym_str USP
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
repository_id_str 2721
spelling Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoniConstruction and characterization of EST mini-libraries generated with low stringency RT-PCR and Cloning of a Schistosoma mansoni ApiraseBiochemistryBiologia molecularBioquímicaClonagemCloningDados de sequência molecularMolecular biologyMolecular sequence dataSchistosoma (Estudo)Schistosoma (Study)Schistosoma mansoniSchistosoma mansoniEste trabalho demonstrou a construção de minibibliotecas de \"Expressed Sequence Tags\" (EST) com o uso de RT-PCR de baixa estringencia e \"primer\" consenso-degenerado. Através do estudo de parâmetros críticos como concentração de sais, temperatura e velocidade de ciclagem, composição dos \"primers\" e qualidade do RNA mensageiro, foi possível padronizar um protocolo. Tal protocolo permitiu um aumento do numero de seqüências por minibiblioteca em relação a protocolos similares existentes na literatura (Dias neto et al., 1997 e 2000) sem perda de características desejáveis como amplificação preferencial do centro dos genes e nomalização das mensagens. As seqüências produzidas levaram a um significativo aumento das seqüências de EST de S. mansoni disponíveis publicamente e permitiu a detecção da existência de novos fragmentos de genes expressos na fase adulta do parasita. Neste trabalho também clonamos uma apirase de S. mansoni cuja a seqüência não havia sido descrita anteriormente. O gene possui cerca de 2,7 mil pares de bases e codifica para uma proteína de 544 aminoácidos. Esta foi expressa em sistema heterologo e utilizada para obtenção de anticorpos policlonais contra esta proteína. Utilizando estes anticorpos foi possível detectar a proteína no tegumento do parasita.This work demonstrates the construction of EST minilibraries employing low stringency RT-PCR and consensus-degenerate primers. Through the study of critical parameters such as salt concentration, cycling temperature and ramp speed, composition of primers and quality of messenger RNA a standard protocol was obtained. Such protocol allowed an increase in the number of sequences per minilibrary in relation to similar protocols in the literature (Dias Neto et al., 1997 and 2000) without no loss in desirable characteristics such as preferential amplification of the central portion of messages and normalization of messages. The sequences produced allowed a significant increase in the publicly available EST sequences of S. mansoni and permitted discovery of new gene fragments expressed in adult stage of the life cycle of the parasite. In this work we also cloned an apyrase of S. mansoni whose sequence had never been described previously. The gene has about 2.7 kilobases and codes for a protein of 544 aminoacids. This protein was expressed in a heterologous system and was used for production of a polyclonal antibody. This antibody was used for detection of this protein in the tegument of the parasite.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPVerjovski-Almeida, SergioMarco, Ricardo de2003-02-24info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttp://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-10052018-143753/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2018-07-19T20:50:39Zoai:teses.usp.br:tde-10052018-143753Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212018-07-19T20:50:39Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
dc.title.none.fl_str_mv Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni
Construction and characterization of EST mini-libraries generated with low stringency RT-PCR and Cloning of a Schistosoma mansoni Apirase
title Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni
spellingShingle Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni
Marco, Ricardo de
Biochemistry
Biologia molecular
Bioquímica
Clonagem
Cloning
Dados de sequência molecular
Molecular biology
Molecular sequence data
Schistosoma (Estudo)
Schistosoma (Study)
Schistosoma mansoni
Schistosoma mansoni
title_short Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni
title_full Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni
title_fullStr Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni
title_full_unstemmed Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni
title_sort Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni
author Marco, Ricardo de
author_facet Marco, Ricardo de
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Verjovski-Almeida, Sergio
dc.contributor.author.fl_str_mv Marco, Ricardo de
dc.subject.por.fl_str_mv Biochemistry
Biologia molecular
Bioquímica
Clonagem
Cloning
Dados de sequência molecular
Molecular biology
Molecular sequence data
Schistosoma (Estudo)
Schistosoma (Study)
Schistosoma mansoni
Schistosoma mansoni
topic Biochemistry
Biologia molecular
Bioquímica
Clonagem
Cloning
Dados de sequência molecular
Molecular biology
Molecular sequence data
Schistosoma (Estudo)
Schistosoma (Study)
Schistosoma mansoni
Schistosoma mansoni
description Este trabalho demonstrou a construção de minibibliotecas de \"Expressed Sequence Tags\" (EST) com o uso de RT-PCR de baixa estringencia e \"primer\" consenso-degenerado. Através do estudo de parâmetros críticos como concentração de sais, temperatura e velocidade de ciclagem, composição dos \"primers\" e qualidade do RNA mensageiro, foi possível padronizar um protocolo. Tal protocolo permitiu um aumento do numero de seqüências por minibiblioteca em relação a protocolos similares existentes na literatura (Dias neto et al., 1997 e 2000) sem perda de características desejáveis como amplificação preferencial do centro dos genes e nomalização das mensagens. As seqüências produzidas levaram a um significativo aumento das seqüências de EST de S. mansoni disponíveis publicamente e permitiu a detecção da existência de novos fragmentos de genes expressos na fase adulta do parasita. Neste trabalho também clonamos uma apirase de S. mansoni cuja a seqüência não havia sido descrita anteriormente. O gene possui cerca de 2,7 mil pares de bases e codifica para uma proteína de 544 aminoácidos. Esta foi expressa em sistema heterologo e utilizada para obtenção de anticorpos policlonais contra esta proteína. Utilizando estes anticorpos foi possível detectar a proteína no tegumento do parasita.
publishDate 2003
dc.date.none.fl_str_mv 2003-02-24
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-10052018-143753/
url http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-10052018-143753/
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv
dc.rights.driver.fl_str_mv Liberar o conteúdo para acesso público.
info:eu-repo/semantics/openAccess
rights_invalid_str_mv Liberar o conteúdo para acesso público.
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.coverage.none.fl_str_mv
dc.publisher.none.fl_str_mv Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
publisher.none.fl_str_mv Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
dc.source.none.fl_str_mv
reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
instname:Universidade de São Paulo (USP)
instacron:USP
instname_str Universidade de São Paulo (USP)
instacron_str USP
institution USP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)
repository.mail.fl_str_mv virginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.br
_version_ 1815256910860910592

Registros relacionados