Síntese de glicopeptídeo de mucina, contendo análogo de antígeno tumoral, com possíveis aplicações terapêuticas em câncer

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Marchiori, Marcelo Fiori
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-23052019-091042/
Resumo: As mucinas são glicoproteínas de alto peso molecular, que tem como característica fundamental a ligação entre o açúcar ?GalNAc e resíduos de aminoácidos de Ser/Thr (?GalNAc-Ser/Thr). Em tumores, a biossíntese de mucinas encontra-se desregulada, com conseqüente alteração nos padrões de O-glicosilação de suas glicoproteínas. Como resultado, formam-se glicanas anormais e incompletas, as quais são continuamente expressas nas células tumorais e geralmente ausentes nos tecidos saudáveis, sendo assim denominadas de Antígenos de Carboidratos Associados a Tumor (\"TACAs\"), tais como os antígenos Tn (?GalNAc-Ser/Thr), sialil-Tn (Neu5Ac???6-?GalNAc-Ser/Thr) e TF (?Gal1-3?GalNAc-Ser/Thr). Dentre as mucinas tumorais, a MUC1 é a mais investigada, sendo constituída por regiões repetidas em tandem da sequência HGVTSAPDTRPAPGSTAPPA, com cinco sítios potenciais para O-glicosilação (O-?GalNAc). Uma vez constatada a importância dos \"TACAs\", estes começaram a ser utilizados em ensaios clínicos como vacinas terapêuticas, mas com limitado sucesso devido à sua baixa imunogenicidade. Sendo assim, glicopeptídeos sintéticos que mimetizem a seqüência peptídica imunogênica do tipo MUC1 (PDTRP) e que contenham análogos de TACAs apresentam elevado potencial de aplicação no desenvolvimento de novas vacinas antitumorais. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi a síntese do glicopeptídeo Pro-Asp-[Neu5Ac?/?2-triazol-6-?GalNAc-Thr]-Arg-Pro-GlyOH 19B ???, mimetizando mucina do tipo MUC1 de tumores e contendo análogo do antígeno STn. Para preparação do glicopeptídeo 19B ????foi necessária a síntese prévia do glicoaminoácido triazólico Neu5Ac-?/?2-triazol-6-?GalNAc-ThrOH 20B ????por reações sequenciais de CuAAc (,,click chemistry\") entre os blocos 68 e 24 ??? e hidrogenólise. O precurssor azido N3-6-?GalNAc-ThrOBn 68 foi obtido por duas rotas sintéticas assim como o intermediário alcino Neu5Ac?/?-2,3-prop-2-inil 24 ???, porém, este útimo não sendo obtido como anômero puro. O emprego de 20B ????em reações de acoplamento com aminoácidos (SPPS) forneceu o glicopeptídeo 19B ??? após purificação por CLAE. Também foi realizada a síntese e purificação do glicopeptídeo modelo NHAcPro-Asp-[?GalNAc]Thr-Arg-Pro-GlyOH 21, contendo o antígeno natural Tn. Futuras etapas de conjugação de 19B ????e 21 à proteína carreadora BSA e ensaios de imunização em camundongos (BALB/c) serão realizadas para avaliação da capacidade de indução de resposta imunológica destes glicopeptídeos
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Como resultado, formam-se glicanas anormais e incompletas, as quais são continuamente expressas nas células tumorais e geralmente ausentes nos tecidos saudáveis, sendo assim denominadas de Antígenos de Carboidratos Associados a Tumor (\"TACAs\"), tais como os antígenos Tn (?GalNAc-Ser/Thr), sialil-Tn (Neu5Ac???6-?GalNAc-Ser/Thr) e TF (?Gal1-3?GalNAc-Ser/Thr). Dentre as mucinas tumorais, a MUC1 é a mais investigada, sendo constituída por regiões repetidas em tandem da sequência HGVTSAPDTRPAPGSTAPPA, com cinco sítios potenciais para O-glicosilação (O-?GalNAc). Uma vez constatada a importância dos \"TACAs\", estes começaram a ser utilizados em ensaios clínicos como vacinas terapêuticas, mas com limitado sucesso devido à sua baixa imunogenicidade. Sendo assim, glicopeptídeos sintéticos que mimetizem a seqüência peptídica imunogênica do tipo MUC1 (PDTRP) e que contenham análogos de TACAs apresentam elevado potencial de aplicação no desenvolvimento de novas vacinas antitumorais. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi a síntese do glicopeptídeo Pro-Asp-[Neu5Ac?/?2-triazol-6-?GalNAc-Thr]-Arg-Pro-GlyOH 19B ???, mimetizando mucina do tipo MUC1 de tumores e contendo análogo do antígeno STn. Para preparação do glicopeptídeo 19B ????foi necessária a síntese prévia do glicoaminoácido triazólico Neu5Ac-?/?2-triazol-6-?GalNAc-ThrOH 20B ????por reações sequenciais de CuAAc (,,click chemistry\") entre os blocos 68 e 24 ??? e hidrogenólise. O precurssor azido N3-6-?GalNAc-ThrOBn 68 foi obtido por duas rotas sintéticas assim como o intermediário alcino Neu5Ac?/?-2,3-prop-2-inil 24 ???, porém, este útimo não sendo obtido como anômero puro. O emprego de 20B ????em reações de acoplamento com aminoácidos (SPPS) forneceu o glicopeptídeo 19B ??? após purificação por CLAE. Também foi realizada a síntese e purificação do glicopeptídeo modelo NHAcPro-Asp-[?GalNAc]Thr-Arg-Pro-GlyOH 21, contendo o antígeno natural Tn. Futuras etapas de conjugação de 19B ????e 21 à proteína carreadora BSA e ensaios de imunização em camundongos (BALB/c) serão realizadas para avaliação da capacidade de indução de resposta imunológica destes glicopeptídeosMucins are high molecular weight glycoproteins that keep as fundamental characteristic the linkage between ?GalNAc sugar and amino acid residues of Ser/Thr (?GalNAc-Ser/Thr). In tumors, mucin production is dysregulated once their biosynthetic mechanisms are impaired with consequent alteration in the O-glycosylation patterns. As a result, abnormal and incomplete glycans are formed, which are continuously expressed in tumor cells and generally absent in healthy tissues. The continual exposure of these glycans gives them the name of Tumor Associated Carbohydrates Antigens (\"TACAs\"), such as Tn (?GalNAc-Ser/Thr), sialyl-Tn (Neu5Ac???6-?GalNAc-Ser/Thr) and TF (?Gal1-3?GalNAc-Ser/Thr) antigens. Among tumor mucins, MUC1 is the most extensively investigated and is composed by tandem repeat regions HGVTSAPDRPAPGSTAPPA sequence with five potential sites for O-glycosylation (O-?GalNAc). In view of the importance of \"TACAS\" as tumor markers of clinical significance, they started to be used in clinical trials as therapeutic vaccines, but with limited success due to their low immunogenicity. Thus, considering their constant presence in tumor mucins such as MUC1, synthetic glycopeptides that not only mimic the peptide sequence of the MUC1 type (PDTRP), but also possess TACAS analogs linked to their peptide chain have high potential for application in the development of anti-tumor vaccines. Thus, the aim of this study was the synthesis of glycocopeptide Neu5Ac?2-triazole-6-?GalNAc-Thr-Arg-Pro-Ala-Pro-GlyOH 19B ???, mimicking mucin MUC1 type tumors and owing STn analogue. In order to obtain glycopeptide 19B ????it was firstly necessary to synthesize the triazole glycoamino acid Neu5Ac-?/?2-triazol-6-?GalNAc-ThrOH 20B ????by sequential reactions of CuAAc (\'click chemistry\') between the building blocks 68 and 24 ??? and hydrogenolysis. The azide precursor N3-6-?GalNAc-ThrOBn 68 was obtained by two different synthetic routes, as well as the intermediate alkyne. The use of 20B ?/? in coupling reactions with amino acid (SPPS) provided the glycopeptide 19B ?/? after HPLC purification. The synthesis and purifications of the glycopeptide model NHAcPro-Asp-[?GalNAc]Thr-Arg-Pro-GlyOH 21, which owns the natural Tn antigen was also performed. Future steps of conjugation of 19B ????e 21 to carrier protein BSA and immunization assays with mice (BALB/c) will be made to evaluate the ability of these glycopeptides to induce immune response.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPCampo, Vanessa LeiriaCarvalho, IvoneMarchiori, Marcelo Fiori2018-08-16info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-23052019-091042/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2021-05-22T15:59:15Zoai:teses.usp.br:tde-23052019-091042Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212021-05-22T15:59:15Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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Marchiori, Marcelo Fiori
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Click chemistry
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