Estudo do receptor Frizzled classe 9 (FZD9), um potencial biomarcador prognóstico e alvo terapêutico

• Autor(a) principal: Bastos, Daniel Rodrigues de
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-22082023-125607/
• topic: Biomarcadores; Biomarkers; Neoplasias de mama triplo negativas; Prognosis; Prognóstico; Receptores Wnt; Receptors Wnt; Triple negative breast neoplasms

Os tumores de mama são frequentes em mulheres de todo o mundo, sendo responsáveis por um alto índice de óbito nessa população. Os tumores de mama se subdividem de acordo com a expressão dos receptores hormonais de estrógeno (ER) e progesterona (PR) e o receptor do fator de crescimento epidérmico humano do tipo 2 (HER2). Desta forma podem ser categorizados como luminais, HER2 e triplo-negativo (TNBC). Os tumores luminais apresentam melhor prognóstico, especialmente pelo benefício terapêutico, seguido dos HER2 que se beneficiam de terapias alvo. O subtipo TNBC é negativo para HER2 e os receptores hormonais e não possui tratamento direcionado, o que colabora para que esse perfil tumoral apresente pior prognóstico. Apesar do avanço no tratamento e prevenção do câncer, uma parcela significativa da população é acometida por esses tumores e constantemente sofrem recidivas, piorando drasticamente o desfecho clínico, independente do subtipo tumoral. A via Wnt é amplamente discutida na literatura, e suas alterações têm sido observadas em diversas malignidades humanas, incluindo os cânceres de mama. O FZD9 é um membro da família frizzled, os quais são caracterizados por serem receptores transmembranares que se ativam por meio de glicoproteínas Wnt. O objetivo do trabalho consistiu em identificar genes diferencialmente expressos em tumores de mama não triplo-negativo (nTNBC) e TNBC e validar os achados em populações com maior número amostral, incluindo validação em amostras de tumores de mulheres brasileiras. Além disso, objetivamos analisar os efeitos da repressão de FZD9 em linhagem celular. A identificação do FZD9 partiu de análise estatística de amostras de pacientes com câncer de mama submetidas à análise de expressão pela técnica de array (Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0 Array). Foram utilizados dados de RNA-seq dos estudos TCGA e SCAN-B para validação do perfil de expressão de FZD9 em função das características clinico-patológicas das pacientes. Foram utilizados ainda amostras de tumores de mama para detecção de FZD9 por meio da técnica de imuno-histoquímica (IHC). A repressão de FZD9 foi realizada pelo sistema lentivirus dCas9-KRAB-MeCP2 e o sgRNA(MS2)_zeo_backbone. A repressão foi confirmada por RT-qPCR, seguindo com ensaios de crescimento celular, migração e clonogênico. O FZD9 foi identificado como diferencialmente expresso entre tumores nTNBC e TNBC e associado com uma pior sobrevida global e livre de doença em ambos os perfis tumorais. Na análise por IHC foram observadas diferenças quanto ao subtipo tumoral (p=0,04) e status HER2 (0,009). Os pacientes classificados com marcação positiva para o FZD9 apresentaram pior sobrevida global, comparados aos casos negativos (HR=2,37; p=0,03). Foi observada ainda uma associação de FZD9 e Ki67 (p=0,037). O tratamento das linhagens celulares MDA-MB-453 e BT549 com TSA ou 5-aza resultou em diminuição dos níveis transcricionais de FZD9. A repressão de FZD9 por meio do sistema CRISPR modificado levou à diminuição do crescimento celular (p=0,001), de migração e da capacidade de formação de colônias (p=0,002). Ensaios adicionais precisam ser realizados a fim de comprovar o efeito da redução de FZD9 e seu papel na inibição da proliferação, migração e invasão em modelos celulares de câncer de mama. Contudo, sugere-se que a expressão diferencial de FZD9 possa ser um potencial alvo terapêutico e prognóstico para o benefício não apenas de pacientes portadoras de TNBC, mas também pacientes nTNBC