Disrupção das ORFs XF-810, XF-818, XF-1940, XF-2359 e XF-2708 de Xylella fastidiosa-CVC possivelmente relacionadas à patogenicidade da bactéria

• Autor(a) principal: Guidetti Gonzalez, Simone
• Data de Publicação: 2004
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11144/tde-20191218-174228/
• topic: BACTÉRIAS FITOPATOGÊNICAS; CLOROSE VARIEGADA DOS CITROS; PATOGENICIDADE

Clorose variegada dos citros (CVC), também conhecida como amarelinho, é uma das doenças de citros mais severas da citricultura brasileira. A CVC é causada pela bactéria limitada ao xilema Xylella fastidiosa. Esta bactéria afeta principalmente as variedades de laranja doce e foi relatada pela primeira vez em 1987 nos Estados de São Paulo e Minas Gerais. O genoma de X. fastidiosa linhagem 9a5c foi completamente seqüenciado e revelou muitos genes provavelmente envolvidos na patogenicidade desta bactéria. Entre estes genes estão as endoglicanases, que são enzimas degradadoras de componentes da parede celular vegetal do hospedeiro e as adesinas, que são proteínas envolvidas na adesão das células bacterianas no xilema, como também auxiliam na formação de agregados bacterianos que causam a obstrução dos vasos do xilema, interferindo no transporte de água e sais minerais para todas as partes da planta, levando ao aparecimento dos sintomas relacionados a CVC. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de mutantes de X. fastidiosa linhagem J1a12, pela disrupção das ORFs Xf-810, Xf-818 e Xf-2708, que apresentam função putativa de endoglicanases, da ORF Xf-2359 possivelmente relacionada à uma pectate liase e da ORF Xf-1940, que apresenta similaridade de seqüência à metionina sulfoxido redutase, proteína identificada com a função de possuir adesão funcional na superfície da célula bacteriana. Neste trabalho, duas estratégias foram utilizadas para a construção dos vetores de disrupção das ORFs selecionadas no genoma de X. fastidiosa: (1) substituição das ORFs pelo gene yfp, que codifica a proteína fluorescente amarela e, (2) inserção do cassete lacZ-KamR interrompendo a região codificadora das ORFs. Estes vetores foram usados para transformar X. fastidiosa, linhagem J1a12 por eletroporação e confirmou-se a obtenção das bactérias mutantes por reações em cadeia da polimerase (PCR) com oligonucleotídeos específicos.