Clonagem e expressão de uma potencial α-neurotoxina de cobra coral Micrurus corallinus em Escherichia coli

• Autor(a) principal: Figueiredo, Jane Oliveira de
• Data de Publicação: 2000
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-31052019-090203/
• topic: Biologia molecular; Molecular biology

A seqüência nxh1 foi isolada a partir de uma biblioteca de cDNA da glândula de veneno da cobra coral Micrurus corallinus. Essa sequência apresenta similaridade estrutural com as toxinas de \"três dígitos\", e principalmente com as α-neurotoxinas, devendo apresentar 4 pontes dissulfeto deduzidas por comparação com outras proteínas desta família. Porém, essa potencial toxina não possui alguns aminoácidos importantes para a interação com o receptor nicotínico de acetilcolina na junção neuromuscular. A potencial toxina NXH1 foi expressa em E. coli de 3 maneiras distintas. Os melhores resultados foram obtidos quando a NXH1 foi expressa em fusão com uma cauda de histidina. Essa construção permitiu uma rápida e eficiente purificação da proteína recombinante. A proteína de fusão foi usada para a produção de um soro específico anti-NXH1. O soro anti-proteína recombinante, assim como o soro do Instituto Butantan, reconheceu a toxina recombinante em Western blot e ELISA. Além disso, o anti-NXH1 reconheceu em Western blot apenas uma banda presente no veneno de M. corallinus, mas não reconheceu os venenos de outras 10 espécies de Micrurus. Experimentos de ligação mostraram que componentes do veneno de M. corallinus ligam-se aos receptores nicotínicos das membranas de músculo de rato. O soro anti-NXH1 não inibiu a ligação do veneno aos receptores, indicando que, ou a NXH1 não é uma α-neurotoxina, ou o antisoro não consegue impedir a ligação da toxina nativa ao receptor, ou que existem outras a-neurotoxinas do veneno que não são bloqueadas pelo soro anti-NXH1.