Análise da ação da C6-ceramida em células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo em cultura

• Autor(a) principal: Silva, Juliana Sampaio
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5167/tde-14122023-131108/
• topic: Apoptose; Apoptosis; Autofagia; Autophagy; Cell Cycle; Cell death; Células-tronco mesenquimais; Ceramidas; Ceramides; Ciclo celular; Espécies reativas de oxigênio; Mesenchymal stem cells; Morte celular; Necrose; Necrosis; Reactive oxygen species

As ceramidas são consideradas lipídios bioativos, com mecanismo de ação derivado da ligação lipídio-lipídio ou lipídio-proteína, com capacidade de agir em vias de sinalização. Porém, sua característica hidrofóbica dificulta a sua utilização in vivo. A utilização de análogos de cadeia curta solúveis em solventes orgânicos, como a C6-ceramida, a qual a célula é permeável, torna possível sua utilização em estudos celulares. As células-tronco mesenquimais (CTM) são utilizadas como modelos em diversos estudos, como aqueles que investigam os mecanismos de morte celular. O presente estudo teve como objetivo avaliar a ação biológica da C6-ceramida exógena nas células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (CTMTA), assim como os processos celulares de alguns tipos de morte celular (apoptose, necrose e autofagia) e proteínas envolvidas nessa ação. Foram utilizadas 5 linhagens de CTMTA que foram incubadas com diferentes concentrações de C6-ceramida (10 a 150 M) pelo período de 24 horas para avaliação da citotoxicidade. A C6-ceramida levou à morte celular de forma dose-dependente, com IC50 de 62,90 M. O processo de apoptose foi observado nas concentrações de 25 M, (19,87 %), 50 M, (26,82 %) e 75 M, (90,51 % das células em apoptose), enquanto que a necrose estava presente em 9,49 % das células na concentração de 75 M. Houve alteração do ciclo celular, com aumento da quantidade de células na fase G0/G1 na concentração de 50 M e com aumento de fase S e diminuição da fase G2/M na concentração de 75 M. Houve perda do potencial transmembranar mitocondrial em concentrações que variaram de 25 a 75 M e da conformação do citoesqueleto observada pelas proteínas F-actina e vimentina. Outro evento constatado foi a inibição da autofagia em 75 M. Foi observada a modulação positiva de proteínas que fazem parte da via de bloqueio da autofagia em 50 M, sendo as proteínas 4EBP1 e Akt, positivas em 27,96 % e 11,04 % das células, respectivamente. Além das proteínas de bloqueio, foram avaliadas proteínas indutoras, Beclin-1 e LC3, que diminuíram com as concentrações de 50 e 75 M de C6-ceramida. Ao mesmo tempo, foi observado acúmulo de organelas ácidas e da proteína p62. Por fim, houve aumento da produção de ROS e do nível de glutationa oxidada nas concentrações de 50 e 75 M de C6-ceramida. Conclui-se que a C6-ceramida aplicada às CTMTA em cultura, pelo período de 24 horas, induziu apoptose e necrose, inibiu a autofagia, levou à perda do potencial transmembranar mitocondrial, além de perturbar o estado redox das células