Desenvolvimento de um sistema biossensor baseado em filmes layer-by-layer de PAH e ácido fólico para detecção de células cancerosas com receptores de folato

• Autor(a) principal: Correia, Abilene Rodrigues
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-16102019-121019/
• topic: Ácido fólico; Biosensor; Biossensor; Folic acid; Nanomedicina; Nanomedicine

A detecção precoce de células tumorais desempenha um papel importante no tratamento eficaz do câncer. Alguns métodos convencionais, como imageamento e radiomarcadores, são eficazes, porém complexos e de alto custo. Por outro lado, biossensores eletroquímicos têm atraído a atenção considerável devido às suas vantagens em relação às técnicas convencionais, como alta sensibilidade, simplicidade, resposta rápida, miniaturização e baixo custo. Estudos recentes mostraram que as superfícies das células tumorais, em especial cânceres ginecológicos, expressam mais receptores de folato (RF) que as células normais. Os receptores de folato são proteínas que têm uma alta afinidade com o ácido fólico (Kd < 1 nmol L-1). Neste estudo foi desenvolvido um biossensor para a detecção da célula tumoral HeLa (célula de câncer do colo do útero), baseado na plataforma eletroquímica modificada com ácido fólico (AF). Como controle negativo foi utilizada a HMEC (célula epitelial mamária humana) e realizado um teste de seletividade com o polímero Poli(ácido acrílico) &ndash; PAA. A superfície do biossensor foi modificada com filmes automontados camada por camada (em inglês layer-by-layer &ndash; LbL) contendo PAH (poli cloridrato de alilamina) e ácido fólico utilizados como materiais com carga positiva e negativa, respectivamente. Os filmes foram caracterizados e otimizados pela técnica de espectroscopia no ultravioleta visível, exibindo uma banda de absorção centrada em 290 e 360 nm. As interações entre PAH e ácido fólico foram investigadas usando a espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier. Análises de microscopia de força atômica revelaram uma morfologia globular para o filme (PAH/AF) contendo 20 bicamadas com uma rugosidade média de 17 nm. Espectroscopia de impedância eletroquímica e voltametria cíclica foram utilizadas para detecção das células. O biossensor desenvolvido foi capaz de detectar receptores de folato na concentração de 10 nmol L-1 com uma faixa linear entre 10 a 40 nmol L-1, R2 = 0,99. O limite de detecção para a célula HeLa foi de 50 células mL-1 obtido na faixa linear entre 50 a 106 células mL-1, R2 = 0,99. O biossensor apresentou uma boa reprodutibilidade e estabilidade (%DPR = 1,95% , n=3).