Determinação de substâncias neuroativas através do acoplamento entre nano cromatografia líquida e espectrometria de massas em tandem (nanoLC-MS/MS)

• Autor(a) principal: Alves, Jussara da Silva
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75135/tde-17072024-090005/
• topic: automated sample preparation; capillary liquid chromatography; cromatografia líquida capilar; nano cromatografia líquida; nano liquid chromatography; neuroactive substances; preparo de amostra automatizado; substâncias neuroativas

A doença de Alzheimer (DA) está correlacionada à formação de agregados proteicos no cérebro, os quais são constituídos, dentre outros compostos, por peptídeos beta-amiloides (Aβ). A cafeína e os hormônios estradiol, estrona e progesterona atuam contra a DA inibindo a formação de Aβ. Os dipeptídeos são capazes de atravessar a barreira hematoencefálica levando fármacos que combatem doenças neurodegenerativas. Neste estudo, métodos analíticos baseados no acoplamento entre nano cromatografia líquida e espectrometria de massas em tandem (nanoLC-MS/MS), foram propostos para a determinação de substâncias neuroativas. Desenvolveu-se um método de extração e pré-concentração dos analitos de interesse presentes em amostras sólidas utilizando o sistema Trap Valve Manager acoplado com nanoLC-MS/MS. Foram avaliadas diversas configurações do sistema nanoLC-MS/MS, bem como, diversas colunas, pré-colunas, traps, fases móveis, volumes de amostras e outros, para a análise de substâncias neuroativas visando seu posterior emprego na análise desses compostos em matrizes biológicas. Desenvolveu-se um método de separação cromatográfica dos hormônios estradiol, estrona, e progesterona e dos dipeptídeos TYR-GLY, GLY-TRP e TRP-GLY, ambos os métodos apresentaram bons resultados, separando os 3 analitos em um curto espaço de tempo. Também desenvolveu-se um método automatizado para amostras sólidas para os dipeptídeos, do qual não se obteve um bom resultado, mostrando a necessidade de melhor escolha de solvente e um estudo preliminar de contaminantes endógenos da matriz da amostra. Um método analítico de determinação de cafeína em pó de café utilizando um sistema de preparo de amostras automatizado foi desenvolvido, o alto teor de cafeína na amostra e sua alta solubilidade evidenciou a necessidade de melhorar a reprodutibilidade do método. Desenvolveu-se um método analítico de separação dos peptídeos Aβ1-38, Aβ1-40 e Aβ1-42 utilizando um sistema de preparo de amostras automatizado, embora os resultados tenham mostrado o potencial da técnica, dificuldades relacionadas à característica de agregamento dos analitos ainda precisam ser vencidos.