Efeito da crotoxina na função de macrófagos de camundongos sépticos
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2020 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP |
Texto Completo: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5165/tde-22092021-103414/ |
Resumo: | A sepse é uma síndrome de alterações fisiológicas e bioquímicas induzidas por infecção que representa um grande problema de saúde pública mundial. Ela envolve a ativação precoce de respostas pró e anti-inflamatórias. A crotoxina (CTX), a principal toxina do veneno da cascavel sul-americana (Crotalus durissus terrificus), apresenta propriedades anti-inflamatórias conhecidas, como inibição da fagocitose por neutrófilos e macrófagos e da produção de citocinas por células dendríticas. Nosso objetivo foi avaliar se a administração de CTX seria capaz de reduzir a mortalidade por sepse através da modulação de parâmetros inflamatórios. Utilizamos camundongos Balb/c machos, nos quais induzimos a sepse por punção e ligadura cecal (CLP) utilizando punção dupla com agulha de calibre 18G. Os animais foram tratados com CTX (0,9 g / animal, por via subcutânea) 1 hora após a CLP e sacrificados após 6 h. Utilizamos amostras de plasma para quantificar citocinas e eicosanóides circulantes. Os macrófagos diferenciados da medula óssea foram utilizados para avaliar o efeito da CTX em diferentes funções dos macrófagos, como: capacidade fagocítica, conteúdo intracelular de superóxido e óxido nítrico (NO), e as produções de peróxido de hidrogênio (H2O2) e citocinas. Nossos resultados mostram que a administração de CTX aumentou a taxa de sobrevivência dos animais de 45% para 70%. Não foi detectado efeito da CTX sobre a concentração de citocinas plasmáticas em animais saudáveis. Camundongos sépticos apresentaram menor concentração plasmática de IL-6 e TNF-alfa após o tratamento com CTX e maior concentração de LXA4 e IL-1beta. Nenhum efeito foi observado na concentração de IL-10 e IFN-gama. Macrófagos diferenciados da medula óssea de camundongos sépticos tratados com CTX fagocitaram menos E. coli, mas mantiveram a produção de NO e H2O2. Também observamos maior concentração de IL-6 no meio de cultura de células provenientes de camundongos sépticos, e a CTX induziu uma redução significativa. Nossos dados mostram que o efeito protetor da CTX na mortalidade por sepse envolve modulação das funções dos macrófagos e da produção de mediadores inflamatórios. |
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Efeito da crotoxina na função de macrófagos de camundongos sépticosEffect of crotoxin on macrophage function in septic miceCamundongos endogâmicos BALB CCitocinasCrotoxinCrotoxinaCytokinesImmune systemInflamaçãoInflammationLipoxinasLipoxinsMice inbred BALB CSepseSepsisSistema imunitárioA sepse é uma síndrome de alterações fisiológicas e bioquímicas induzidas por infecção que representa um grande problema de saúde pública mundial. Ela envolve a ativação precoce de respostas pró e anti-inflamatórias. A crotoxina (CTX), a principal toxina do veneno da cascavel sul-americana (Crotalus durissus terrificus), apresenta propriedades anti-inflamatórias conhecidas, como inibição da fagocitose por neutrófilos e macrófagos e da produção de citocinas por células dendríticas. Nosso objetivo foi avaliar se a administração de CTX seria capaz de reduzir a mortalidade por sepse através da modulação de parâmetros inflamatórios. Utilizamos camundongos Balb/c machos, nos quais induzimos a sepse por punção e ligadura cecal (CLP) utilizando punção dupla com agulha de calibre 18G. Os animais foram tratados com CTX (0,9 g / animal, por via subcutânea) 1 hora após a CLP e sacrificados após 6 h. Utilizamos amostras de plasma para quantificar citocinas e eicosanóides circulantes. Os macrófagos diferenciados da medula óssea foram utilizados para avaliar o efeito da CTX em diferentes funções dos macrófagos, como: capacidade fagocítica, conteúdo intracelular de superóxido e óxido nítrico (NO), e as produções de peróxido de hidrogênio (H2O2) e citocinas. Nossos resultados mostram que a administração de CTX aumentou a taxa de sobrevivência dos animais de 45% para 70%. Não foi detectado efeito da CTX sobre a concentração de citocinas plasmáticas em animais saudáveis. Camundongos sépticos apresentaram menor concentração plasmática de IL-6 e TNF-alfa após o tratamento com CTX e maior concentração de LXA4 e IL-1beta. Nenhum efeito foi observado na concentração de IL-10 e IFN-gama. Macrófagos diferenciados da medula óssea de camundongos sépticos tratados com CTX fagocitaram menos E. coli, mas mantiveram a produção de NO e H2O2. Também observamos maior concentração de IL-6 no meio de cultura de células provenientes de camundongos sépticos, e a CTX induziu uma redução significativa. Nossos dados mostram que o efeito protetor da CTX na mortalidade por sepse envolve modulação das funções dos macrófagos e da produção de mediadores inflamatórios.Sepsis is a syndrome of physiological and biochemical abnormalities induced by infection that represents a major public health concern. It involves the early activation of pro and anti-inflammatory responses. Crotoxin (CTX), the major toxin in the venom of the South American rattlesnake (Crotalus durissus terrificus), has known anti-inflammatory properties, such as inhibition of phagocytosis by neutrophils and macrophages and the production of cytokines by dendritic cells. Our objective was to assess whether CTX administration would be able to reduce sepsis mortality through the modulation of inflammatory parameters. We used male Balb/c mice, in which we induced sepsis by cecal ligation and puncture (CLP) using double puncture with 18G needle. Animals were treated with CTX (0.9 g/animal, subcutaneously) 1 hour after CLP and euthanized after 6h. We used plasma samples to quantify circulating cytokines and eicosanoids. Differentiated bone marrow macrophages were used to evaluate the effect of CTX on different macrophages functions, such as: the phagocytic capacity, intracellular content of superoxide and nitric oxide (NO), and the production of hydrogen peroxide (H2O2) and cytokines. Our results show that the administration of CTX increased the survival rate of the animals from 45% to 70%. No effect of CTX on plasma cytokine concentration was detected in healthy animals. Septic mice showed lower plasma concentration of IL-6 and TNF-alpha after CTX treatment and higher concentration of LXA4 and IL-1beta. No effect was observed on the concentration of IL-10 and IFN-gamma. Differentiated bone marrow macrophages from septic mice treated with CTX phagocytosed less E. coli, but sustained NO and H2O2 production. We also observed higher concentration of IL-6 in cell culture medium from septic mice, and CTX induced a significant reduction. Our data show that the protective effect of CTX on sepsis mortality involves modulation of macrophage functions and the production of inflammatory mediators.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPLima, Thais Martins deBretones, Marisa Langeani2020-12-07info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5165/tde-22092021-103414/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2021-09-22T15:18:06Zoai:teses.usp.br:tde-22092021-103414Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212021-09-22T15:18:06Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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A sepse é uma síndrome de alterações fisiológicas e bioquímicas induzidas por infecção que representa um grande problema de saúde pública mundial. Ela envolve a ativação precoce de respostas pró e anti-inflamatórias. A crotoxina (CTX), a principal toxina do veneno da cascavel sul-americana (Crotalus durissus terrificus), apresenta propriedades anti-inflamatórias conhecidas, como inibição da fagocitose por neutrófilos e macrófagos e da produção de citocinas por células dendríticas. Nosso objetivo foi avaliar se a administração de CTX seria capaz de reduzir a mortalidade por sepse através da modulação de parâmetros inflamatórios. Utilizamos camundongos Balb/c machos, nos quais induzimos a sepse por punção e ligadura cecal (CLP) utilizando punção dupla com agulha de calibre 18G. Os animais foram tratados com CTX (0,9 g / animal, por via subcutânea) 1 hora após a CLP e sacrificados após 6 h. Utilizamos amostras de plasma para quantificar citocinas e eicosanóides circulantes. Os macrófagos diferenciados da medula óssea foram utilizados para avaliar o efeito da CTX em diferentes funções dos macrófagos, como: capacidade fagocítica, conteúdo intracelular de superóxido e óxido nítrico (NO), e as produções de peróxido de hidrogênio (H2O2) e citocinas. Nossos resultados mostram que a administração de CTX aumentou a taxa de sobrevivência dos animais de 45% para 70%. Não foi detectado efeito da CTX sobre a concentração de citocinas plasmáticas em animais saudáveis. Camundongos sépticos apresentaram menor concentração plasmática de IL-6 e TNF-alfa após o tratamento com CTX e maior concentração de LXA4 e IL-1beta. Nenhum efeito foi observado na concentração de IL-10 e IFN-gama. Macrófagos diferenciados da medula óssea de camundongos sépticos tratados com CTX fagocitaram menos E. coli, mas mantiveram a produção de NO e H2O2. Também observamos maior concentração de IL-6 no meio de cultura de células provenientes de camundongos sépticos, e a CTX induziu uma redução significativa. Nossos dados mostram que o efeito protetor da CTX na mortalidade por sepse envolve modulação das funções dos macrófagos e da produção de mediadores inflamatórios. |
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