O papel da enzima glicolítica piruvato quinase M2 (PKM2) na sinalização via IL-17A em queratinócitos e patogênese da psoríase

• Autor(a) principal: Públio, Gabriel Azevedo
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-05062020-090755/
• topic: IL-17A; IL-17A; Keratinocytes; Piruvato quinase M2 (PKM2); Psoríase; Psoriasis; Pyruvate kinase M2 (PKM2); Queratinócitos

A psoríase é uma doença crônica imunomediada que acomete a pele, caracterizada pela ativação e hiperproliferação de queratinócitos em resposta à citocinas, como IL- 17A. Estudos demonstram que células do sistema imune passam por uma reprogramação metabólica glicolítica (efeito warburg) durante a ativação, a qual é importante para modular as suas funções. Nesse sentido, foi demonstrado que a piruvato quinase M2 (PKM2), uma enzima do metabolismo glicolítico, é essencial para resposta inflamatória em macrófagos e linfócitos, além disso, descrevemos a participação dessa enzima no desenvolvimento da psoríase experimental. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho é investigar os efeitos funcionais e moleculares da PKM2 na ativação de queratinócitos ativados por IL-17A. Primeiramente, observamos um aumento na expressão de PKM2 em uma linhagem de queratinócitos humanos (HaCat) frente a estimulo de IL-17A, visto por qPCR, Western Blot e Imunofluorescência. Em um passo seguinte, utilizamos a tecnologia CRISPR/Cas9 para gerar células HaCat deficientes para PKM2. Frente a ausência dessa enzima observamos uma redução na produção de mediadores inflamatórios como TNF- α e CXCL-1/IL-8 pelas células ativadas por IL-17A, resultando numa menor capacidade de recrutar neutrófilos em um ensaio de quimiotaxia in vitro. Além disso, a ausência de PKM2 nos queratinócitos inibiu a sinalização de NF-kB, avaliado pela translocação a subunidade p65 e pela atividade de NF-kB utilizando Células HaCat-Luc. Mecanisticamente, observamos que a PKM2 está interagindo com as proteínas acessórias ao receptor de IL-17A (IL-17RA), Act1 e TRAF6. Baseado no exposto acima, os resultados desse trabalho ressaltam a importância da PKM2 no desenvolvimento da psoríase, atuando na sinalização de IL-17A em queratinócitos, o que nos permite acreditar que esta molécula seja um potencial alvo terapêutico para tratamento de psoríase.