Identificação de ribonuclease potencialmente associada a degradação de dupla fita de RNA (dsRNA) em Tuta absoluta (Meyrick) e a eficiência no silenciamento gênico induzido pelo RNA de interferência (RNAi)

• Autor(a) principal: Baldo, Anieli
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-08012021-111759/
• topic: TaREase; TaREase; Tuta absoluta; Tuta absoluta; eficiência de RNAi; ribonuclease; ribonuclease; RNA de interferência; RNA interference; RNAi efficiency

A traça-do-tomateiro Tuta absoluta Meyrick (Lepidoptera: Gelechiidae), nativa da América do Sul, é uma praga importante da família Solanaceae e uma das pragas economicamente mais devastadoras do tomateiro (Solanum lycopersicum) no mundo. Foi identificada no Brasil na década de 1980 e invadiu a Europa em 2006, onde se alastrou por importantes regiões produtoras de tomate, causando grandes prejuízos. Sua principal forma de controle consiste na utilização de inseticidas químicos, porém o uso indiscriminado desses produtos tem levado a perda de eficácia e a resistência de T. absoluta tem sido relatada. Portanto, a busca por formas alternativas de controle desse inseto-praga se faz necessária e a utilização da técnica de RNAi (RNA interferente) tem se demonstrado como alternativa de grande potencial para o controle de T. absoluta. O RNAi consiste em um mecanismo de regulação pós-transcricional em nível de mRNA, levando ao silenciamento gênico desencadeado após a exposição a moléculas de RNA fita dupla (dsRNA). Contudo, é conhecido que a utilização dessa técnica apresenta variação entre as ordens e espécies de insetos, e a ordem Lepidoptera tem sido apontada como recalcitrante ao silenciamento gênico via RNAi. Nesse sentido, nucleases presentes no lumen do intestino dos insetos com a capacidade de degração de dsRNA têm sido apontadas como possível mecanismo associado à recalcitrância dessa ordem ao RNAi. Recentemente, foi descrita a nuclease RNAi efficiency related nucleasse (REase) que está presente no intestino médio de insetos da ordem Lepidoptera e que são capazes de digerir moléculas de dsRNA antes que sejam processadas pela enzima Dicer, afetando assim a eficiência do RNAi. Sendo assim, esse trabalho teve como objetivo a busca em transcriptoma de T. absoluta por ribonucleases como a recém descoberta REase e a investigação de sua relação com a eficiência do uso da técnica de RNAi nesse inseto-praga. Após a busca de sequências, foram identificados cinco contigs dos quais três continham o domínio PIN característico e após análises filogenéticas, foi constatada a presença de dois integrantes da nova família de proteínas REase, denominados de TaREaseI e TaREaseII, em T. absoluta. Esse é o primeiro relato da presença de mais de um membro dessa família de proteínas em uma espécie da ordem Lepidoptera. Entretanto, a análise de expressão relativa de TaREaseI e TaREaseII após a exposição a moléculas de dsRNA homólogas a regiões do gene codificador da proteína fluorescente GFP não demonstrou diferenças significativas de expressão.