Fatores de transcrição envolvidos com a ativação dos receptores de progesterona durante o diestro não gestacional de cadelas

• Autor(a) principal: Santos, Francislaine Anelize Garcia
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-09042020-105036/
• topic: Cadelas; Célula luteínica; Dog; Gene silencing; Luteal cell; Progesterona; Progesterone; Progesterone nuclear receptor; Receptor nuclear de progesterona; Regulador transcricional; Sequenciamento; Sequencing; Silenciamento gênico; Transcriptional regulator

A função do corpo lúteo na cadela foi abordada em vários estudos, visando a identificação de mecanismos luteotróficos e luteolíticos, porém a regressão luteínica na cadela cíclica ainda não foi bem caracterizada, assim como todos os fatores luteotróficos. Sabe-se que a progesterona (P4) é um fator luteotrófico capaz de ativar receptores nucleares de progesterona (PGRs) e exerce diferentes atividades sobre regiões promotoras de genes responsivos à progesterona, aumentando ou diminuindo a transcrição dos genes a depender da disponibilidade de fatores de transcrição em células-alvo. O objetivo do trabalho foi caracterizar a expressão gênica do PGR, seus fatores de transcrição com sítios de ligação ao PGR, o AP-1, o FOXO3 e o HOXA5 e os genes StAR, CYP11A1, HSD3B2, responsivos ao PGR, no corpo lúteo (CL) canino. Foram utilizados CLs provenientes de cadelas que passaram por ovariosalpingohisterectomia nos dias 10, 20, 30, 40, 50 e 60 após a ovulação (p.o). Para determinação do D0 foram realizadas coletas de sangue para dosagem da P4. Os CLs coletados foram utilizados para extração de RNA total a partir do protocolo de TRIZOL e posterior análise por RNA-Seq seguindo o protocolo TruSeq RNA Sample Preparation e validação dos genes por PCR em tempo real. Avaliamos in vitro os efeitos do silenciamento de PGR pela técnica de RNA de interferência (RNAi) e em células estimuladas com P4 para os genes alvos. Após as validações, os resultados obtidos foram testados, através do programa SAS, de acordo com sua homogeneidade e normalidade, e apresentados como média ± EPM, diferenças de p ≤ 0,05 foram consideradas significativas. Houve o aumento de AP-1 e FOXO3 nas células com adição de P4 (500 ng/mL) e nas silenciadas com siRNA PGR. A análise de RNA-Seq mostrou o aumento de AP-1 no dia 30 p.o e a análise de qPCR mostrou o aumento de FOXO3 no dia 40 p.o. A análise de RNA-Seq indicou um aumento de HOXA5 no dia 40 p.o e no silenciamento de PGR uma diminuição de HOXA5. Os resultados sugerem que o aumento de AP-1 possa regular positivamente a formação do CL durante diestro e o aumento de HOXA5 possa regular negativamente. A ativação de FOXO3 parece estar evolvida tanto na proliferação quanto na regressão, de acordo com os estímulos hormonais nesta fase. Sugere-se que a ligação da P4 ao PGR ative a transcrição de genes envolvidos com os processos de proliferação e regressão do CL. Assim, concluímos que o receptor de progesterona é responsivo a fatores de transcrição e influencia a expressão de enzimas esteroidogênicas, exercendo papel na regulação da proliferação e sobrevivência celular do corpo lúteo durante o diestro.