Validação de parâmetros de mérito para quantificação de microcistina-LR por meio de cromatografia líquida de alta eficiência acoplado a detector de arranjo de diodos

• Autor(a) principal: Konzen, Raquel de Almeida
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UTFPR (da Universidade Tecnológica Federal do Paraná (RIUT))
• Texto Completo: http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/9166
• topic: CNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA::QUIMICA ANALITICA::ANALISE DE TRACOS E QUIMICA AMBIENTAL; Análise cromatográfica; Cianobactéria; Cianotoxinas; Chromatographic analysis; Cyanobacteria; Cyanobacterial toxins

Cianobactérias são microrganismos que, quando submetidos a determinadas condições ambientais, podem passar a produzir e liberar diferentes metabólitos, dentre eles as cianotoxinas. Uma cianotoxina hepatotóxica de grande importância é a microcistina-LR (MCLR), de aparecimento comum em florações de cianobactérias do gênero Microcystis, principalmente, e com efeitos severos ao organismo humano e de animais se ingerida. A detecção deste metabólito em água é comumente realizada a partir de técnicas cromatográficas, as quais necessitam de etapas prévias de otimização e validação do método escolhido. O objetivo do estudo foi a otimização e validação de um método cromatográfico para a quantificação da microcistina-LR, e também a análise cromatográfica de extratos de cianobactérias contendo a toxina. Devido à baixa sensibilidade da técnica na detecção deste composto, foram realizados ensaios de recuperação deste analito, através da técnica de extração em fase sólida (SPE). As análises foram conduzidas em um cromatógrafo líquido de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (HPLC-DAD) (Agilent - 1260 Infinity). Com base em dados da literatura, o método a ser validado consistiu em uma eluição isocrática utilizando-se como fase móvel (FM) acetonitrila (ACN) com ácido trifluoracético (TFA) 0,05% (Fase A) e água com (TFA) 0,05% (Fase B) e coluna cromatográfica C18 (250 mm x 4,6 mm x 5 μm). Através da otimização do método, foram definidas como melhores condições de análise o monitoramento em 238 nm, proporção de FM de 60H2O:40ACN, com volume de injeção de 20 µL e vazão de 1,0 mL min-1. Na validação em água ultrapura, foi estabelecido que o método é linear para a faixa de trabalho testada, com um limite de detecção (LD) de 0,06 mg L-1 e um limite de quantificação (LQ) de 0,17 mg L-1. Uma metodologia para concentração da MC-LR também foi estabelecida, através da técnica de extração em fase sólida utilizando-se cartuchos CHROMABOND® C-18 end-capped, sendo que recuperações de 98,51 ± 2,74% foram obtidas. Testes envolvendo extratos obtidos a partir de cultivo de cianobactérias, preparados em estudos anteriores, também foram executados. A condição previamente estabelecida para analisar o padrão em água ultrapura e metanol não se mostrou adequada para quantificar a toxina na matriz do extrato, já que houve co-eluição de interferentes junto à MC-LR. Sendo assim, eluições gradiente foram testadas, sendo estabelecida a condição em que a Fase A variou de 30% a 50% de 0 a 70 minutos como a que melhor separou ambos os picos. O método com eluição gradiente é linear para a faixa de concentrações testada, com um LD de 0,03 mg L-1 e um LQ de 0,09 mg L-1. Um dos extratos, denominado de extrato 2, não apresentou MC-LR, enquanto que os outros dois extratos (1 e 3) demonstraram possuir concentrações de 7,10 mg L-1 e 0,68 mg L-1 respectivamente.