Estabelecimento de protocolo para extração de DNA de Apis mellifera visando a utilização de marcadores moleculares do tipo microssatélite

• Autor(a) principal: Priester, Andre Luis
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UTFPR (da Universidade Tecnológica Federal do Paraná (RIUT))
• Texto Completo: http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/11163
• topic: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::ZOOTECNIA; Abelhas africanizadas; Abelhas - Criação; DNA; Africanized honeybee; Bee culture

As abelhas africanizadas são as maiores responsáveis pelo desenvolvimento da atividade apícola brasileira. Conhecer a variabilidade genética, através da análise do DNA, de colônias que são utilizadas em programa de melhoramento genético, é de extrema importância para obter ganhos genéticos. Neste sentido, o objetivo do presente trabalho foi o de padronizar um protocolo de extração de DNA de abelhas africanizadas Apis mellifera provenientes de programa de melhoramento genético conduzido na Universidade Tecnológica Federal do Paraná - Câmpus Dois Vizinhos. Foram utilizadas rainhas e operárias, sendo realizado protocolos com a ponta das asas das rainhas e com todo o corpo das operárias para a extração de DNA. As extrações foram feitas utilizando um kit comercial ‘’Wizard genomic DNA Purification kit’’, e foram testados 5 protocolos diferentes (1, 2, 3, 4 e 5), sendo que para os quatro primeiros protocolos foram utilizadas asas de abelha para realizar a extração de DNA, e no último protocolo foi utilizado a abelha inteira para realizar a extração do DNA genômico total. Os marcadores SSRs utilizados nesse trabalho para padronização através da PCR (Polymerase Chain Reaction) foram: mrjp3, mrjp5, Ap243, Ap049 e Ap288 que foram amplificados pelo programa de amplificação Touchdown e submetidos a eletroforese para verificar a qualidade da amplificação. Dos protocolos analisados, apenas o nº 5 gerou material de qualidade para amplificação via PCR, sendo que para os demais protocolos não foi possível obter uma quantidade de DNA genômico total para realizar as reações de PCR, que são essenciais para realizar a genotipagem de locos SSRs, que serão empregados em um estudo futuro de diversidade genética.