Detecção e caracterização molecular de vírus entéricos em águas residuárias na cidade do Rio de Janeiro

• Autor(a) principal: Fumian, Tulio Machado
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/6312
• topic: Águas residuárias; Virologia; Poluição Ambiental

Entre a grande diversidade de vírus que infectam o homem, muitos são excretados em grandes concentrações nas fezes ou urina de indivíduos sintomáticos ou assintomáticos, estando presentes em águas residuárias provenientes de esgotos domésticos. Metodologias moleculares de amplificação genômica vêm sendo utilizadas para detecção e quantificação de vírus nestas águas, de modo que os estudos de virologia ambiental representam uma ferramenta a mais na determinação dos vírus circulantes em uma dada área geográfica. Este estudo teve como objetivo avaliar a disseminação dos principais vírus responsáveis pela gastrenterite aguda infantil [rotavírus A (RVA), norovírus (NoV) e astrovírus humanos (HAstV)] , em águas residuárias da cidade do Rio de Janeiro, assim como avaliar os adenovírus humanos (HAdV) e poliomavírus JC (JCPyV) como marcadores virais de contaminação ambiental. Com este propósito,metodologias de concentração, detecção, quantificação e caracterização molecular de vírus foram estabelecidas e aplicadas em águas residuárias de duas Estações de Tratamento de Esgoto (ETE) da cidade. Inicialmente, realizou-se o monitoramento de RVA, NoV, HAstV e JCPyV na ETE Fiocruz (2004 -2005) com a utilização do método de concentração viral baseado na ultrafiltração com membrana carregada negativamente. Nestes estudos demonstrou-se a disseminação destes vírus em amostrar de esgoto bruto e em menor escala em esgoto tratado, assim como se avaliou as taxas de recuperação de NoV e HAstV pelo método de concentração utilizado e metodologias de detecção e quantificação viral. A caracterização dos agentes virais detectados demonstrou a circulação dos genótipos mais prevalentes (RVA G1 e P[8]; NoV GII; HAstV-1 e JCPyV tipo 3). As baixas taxas de recuperação viral obtidas com o método de filtração, assim como a ausência de controle interno nos estudos anteriores, apontaram a necessidade de se estabelecer diferentes métodos para investigações. Deste modo, estabeleceu-se o método de concentração de vírus por ultracentrifugação, assim como um protocolo de quantificação do bacteriófago PP7, utilizado como controle interno, e outro para quantificação de RVA. Estes métodos foram aplicados em um novo monitoramento(2009 -2010) realizado em ETE de grande porte (ETE Alegria) visando obter dados mais consistentes dos vírus circulantes na população do Rio de Janeiro. Os resultados provenientes deste monitoramento demonstraram que os RVA, HAdV e os JCPyV foram os mais prevalentes nas amostras de águas residuárias seguidos pelos NoV e HAstV. A caracterização molecular demonstrou a diversidade de genótipos de vírus circulantes em concordância com oso obtidos anteriormente, exceto para os RVA, RVA G2 e P[4] foram caracterizados em 100% das amostras de esgoto bruto revelando uma alteração do perfil dos genótipos circulantes após a introdução da Rotarix® no país em 2006. Neste estudo não foram detectadas cepas vacinais de RVA. Os resultados obtidos na ETE Alegria demonstraram uma redução de 2 logs na carga viral após o tratamento. Os dados quantitativos confirmaram o potencial do HAdV como marcador viral de contaminação, assim como revelaram a importância de se avaliar a descarga local de vírus no ambiente, de modo a se identificar os vírus presentes em altas concentrações que devem ser considerados em estudos de avaliação de risco.