Desenvolvimento e avaliação de um sistema baseado em PCR em tempo real para o diagnóstico da infecção por Leishmania (Leishmania) infantum em cães

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cavalcanti, Milena de Paiva
Data de Publicação: 2008
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/3902
Resumo: O diagnóstico precoce da leishmaniose visceral (LV) é importante para evitar danos severos que podem levar o paciente à morte. Neste contexto, os métodos moleculares vêm sendo desenvolvidos com destaque para a tecnologia da reação em cadeia da polimerase (PCR). Recentemente, a PCR apresentou um significativo avanço em sua tecnologia; é a PCR quantitativa em tempo real (qPCR). Objetivouse desenvolver e avaliar um sistema baseado em qPCR para o diagnóstico da infecção por Leishmania infantum em cães, bem como efetuar uma análise comparativa com a PCR convencional utilizada no Serviço de Referência em Leishmanioses de Pernambuco. Com base na seqüência NCBI Z35273.1 de L. infantum disponível no BLAST-NCBI foram desenhados primers específicos para o complexo L. donovani. A combinação dos primers gerou sistemas de detecção, sendo o sistema Linf 1 B o mais promissor. A curva-padrão foi gerada resultando em limite de detecção de 10 fg de DNA genômico de L. infantum (7x10-2 parasitas), e = 0.9417, R2= 0.931 e slope= -3.47. O sistema desenvolvido foi avaliado em sangue de cães positivos e negativos para leishmaniose visceral canina, apresentando sensibilidade de 100 por cento e especificidade de 83,33 por cento. A análise comparativa com o PCR convencional mostrou que, utilizando-se amostras de sangue, o qPCR é mais sensível (sensibilidade PCR= 23,8 por cento, qPCR= 100 por cento). Em relação à especificidade, apesar da PCR convencional ter apresentado valor de 100 por cento, as análises por meio dos intervalos de confiança e o teste 2? mostraram que os dois testes (PCR convencional e qPCR) são equivalentes. Desta forma, conclui-se que os resultados obtidos para o sistema de qPCR, em amostra de sangue de cães e, a análise comparativa com a PCR convencional (RV1/RV2), sugerem sua utilização nas rotinas de diagnóstico da infecção por L. infantum
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Objetivouse desenvolver e avaliar um sistema baseado em qPCR para o diagnóstico da infecção por Leishmania infantum em cães, bem como efetuar uma análise comparativa com a PCR convencional utilizada no Serviço de Referência em Leishmanioses de Pernambuco. Com base na seqüência NCBI Z35273.1 de L. infantum disponível no BLAST-NCBI foram desenhados primers específicos para o complexo L. donovani. A combinação dos primers gerou sistemas de detecção, sendo o sistema Linf 1 B o mais promissor. A curva-padrão foi gerada resultando em limite de detecção de 10 fg de DNA genômico de L. infantum (7x10-2 parasitas), e = 0.9417, R2= 0.931 e slope= -3.47. O sistema desenvolvido foi avaliado em sangue de cães positivos e negativos para leishmaniose visceral canina, apresentando sensibilidade de 100 por cento e especificidade de 83,33 por cento. A análise comparativa com o PCR convencional mostrou que, utilizando-se amostras de sangue, o qPCR é mais sensível (sensibilidade PCR= 23,8 por cento, qPCR= 100 por cento). Em relação à especificidade, apesar da PCR convencional ter apresentado valor de 100 por cento, as análises por meio dos intervalos de confiança e o teste 2? mostraram que os dois testes (PCR convencional e qPCR) são equivalentes. Desta forma, conclui-se que os resultados obtidos para o sistema de qPCR, em amostra de sangue de cães e, a análise comparativa com a PCR convencional (RV1/RV2), sugerem sua utilização nas rotinas de diagnóstico da infecção por L. infantumFundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.porLeishmaniose visceralLeishmania infantumReação em cadeia da polimerasePrimers do DNADiagnósticoDesenvolvimento e avaliação de um sistema baseado em PCR em tempo real para o diagnóstico da infecção por Leishmania (Leishmania) infantum em cãesDevelopment and evaluation of system based on real-time in PCR for the diagnosis of Leishmania (Leishmania) infantum infection in dogsinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisCentro de Pesquisas Aggeu MagalhãesFundação Oswaldo CruzDoutorRecife/PEinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/3902/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINAL000021.pdfapplication/pdf7148485https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/3902/2/000021.pdfd3a3aca355db988afba0a31f293e9c1eMD52TEXT000021.pdf.txt000021.pdf.txtExtracted texttext/plain148495https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/3902/5/000021.pdf.txt76e8ca5c1ac76555e405ad5fcd7c0072MD55THUMBNAIL000021.pdf.jpg000021.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1688https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/3902/4/000021.pdf.jpgcac34983d489b859473f4ba8a6013b59MD54icict/39022023-10-03 11:23:30.833oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352023-10-03T14:23:30Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false
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