PCR multiplex em tempo real para detecção de fontes alimentares e de Leishmania spp. em flebotomíneos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Sales, Kamila Gaudêncio da Silva
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60243
Resumo: No presente trabalho, objetivou-se desenvolver um ensaio de PCR em tempo real multiplex para detectar simutaneamente DNA de cão, humano e Leishmania spp. em flebotomíneos. Primers e sondas TaqMan visando os genes mitocondriais: citocromo c oxidase subunidade I e citocromo b de cão e humano, respectivamente, foram combinados em um ensaio multiplex, no qual também foram incluídos primers e uma sonda TaqMan visando o DNA do cinetoplasto de Leishmania. O ensaio multiplex foi 100% específico, com sensibilidade analítica de 103 fg por reação para cão e humano e 1 fg para Leishmania. Ao testar fêmeas de flebotomíneos ingurgitadas coletadas em campo (95 Migonemyia migonei e dois Nyssomyia intermedia), 50 M. migonei foram positivas para um ou dois alvos (taxas de positividade: 45,4% para humanos, 4,1% para cães e 12,4% para Leishmania spp.). Este ensaio multiplex de PCR em tempo real representa um novo e rápido teste para detectar DNA de cão, humano e Leishmania spp. em fêmeas de flebotomíneos e, portanto, uma ferramenta para avaliar o risco de transmissão de Leishmania em áreas onde as leishmanioses são endêmicas.
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O ensaio multiplex foi 100% específico, com sensibilidade analítica de 103 fg por reação para cão e humano e 1 fg para Leishmania. Ao testar fêmeas de flebotomíneos ingurgitadas coletadas em campo (95 Migonemyia migonei e dois Nyssomyia intermedia), 50 M. migonei foram positivas para um ou dois alvos (taxas de positividade: 45,4% para humanos, 4,1% para cães e 12,4% para Leishmania spp.). Este ensaio multiplex de PCR em tempo real representa um novo e rápido teste para detectar DNA de cão, humano e Leishmania spp. em fêmeas de flebotomíneos e, portanto, uma ferramenta para avaliar o risco de transmissão de Leishmania em áreas onde as leishmanioses são endêmicas.The goal of the present study was to develop a multiplex real-time PCR assay for simultaneous detection of DNA from dog and human and Leishmania spp. in sand flies. Primers and TaqMan probes targeting the mitochondrially encoded cytochrome c oxidase I and cytochrome b genes of dog and human, respectively, were combined in a multiplex assay, which also includes primers and a TaqMan probe targeting the Leishmania kinetoplast DNA. The multiplex assay was 100% specific, with analytical sensitivities of 103 fg/reaction for dog and human and 1 fg for Leishmania. By testing field-collected engorged female sand flies (95 Migonemyia migonei and two Nyssomyia intermedia), 50 M. migonei were positive for one or two targets (positivity rates: 45.4% for human, 4.1% for dog and 12.4% for Leishmania spp.). This multiplex real-time PCR assay represents a novel fast assay for detecting DNA from dog, human and Leishmania spp. in female sand flies and therefore a tool for assessing the risk of Leishmania transmission to these hosts in areas where leishmaniases are endemic.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.Universidade Federal do Paraná, Curitiba, PR, BrasilUniversidade Federal de Pernambuco, Recipe, PE, BrasilporFlebotomíneosAlimentação sanguíneaPCR em tempo realMultiplex.PhlebotominaeFlebotomíneosAlimentação sanguíneaReação em Cadeia da Polimerase em Tempo RealmétodosReação em Cadeia da Polimerase MultiplexmétodosLeishmaniaPCR multiplex em tempo real para detecção de fontes alimentares e de Leishmania spp. em flebotomíneosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis2019Instituto Aggeu MagalhãesFundação Oswaldo CruzRecifePrograma de Pós-Graduação em Biociências e Biotecnologia em Saúdeinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/60243/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALkamile_sales_iam_dout_2019.pdfkamile_sales_iam_dout_2019.pdfapplication/pdf12015763https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/60243/2/kamile_sales_iam_dout_2019.pdfb37d02a5f8c381e7934f433240eb1df0MD52icict/602432023-08-28 10:45:03.047oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352023-08-28T13:45:03Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false
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