Potencial terapêutico dos inibidores de Smoothened em Carcinoma Escamocelular Oral

• Autor(a) principal: Freitas, Raíza Dias de
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/25047
• topic: Carcinoma de células escamosas; Proteínas Hedgehog; Vismodegib; Itraconazol; Squamous cell carcinoma; Hedgehog proteins; Vismodegib; Itraconazole

INTRODUÇÃO: O carcinoma escamocelular oral (CEO) é a neoplasia de cabeça e pescoço mais frequente e, apesar de sua relevância, foram observados poucos avanços na inibição farmacológica de vias relacionadas com a patogênese do CEO, como a via Hedgehog HH. Neste contexto, os inibidores de SMO, vismodegib e itraconazol, têm se destacado como promissores. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do vismodegib e itraconazol sobre a expressão gênica dos componentes da via HH (PTCH1, SMO e GLI1), ciclo e morte celular em células de CEO. MATERIAL E MÉTODOS: Após a caracterização da expressão da via HH nas células de CEO (CAL27, SCC4, SCC9 e HSC3) através de qPCR, a citotoxicidade dos inibidores de SMO foi determinada em diversas linhagens tumorais através do método Alamar Blue após 72h de tratamento. Este mesmo ensaio foi realizado na CAL27 nos tempos de 6h, 12h, 24h, 48h e 72h. O efeito dos inibidores sobre a viabilidade celular da CAL27 foi avaliado através do Azul de Tripan após 24h e 48h nas concentrações de 25 e 50 μg/mL. Foi realizada a análise da expressão gênica dos componentes da via HH e análise morfológica após 24h de tratamento em ambas as concentrações, bem como a avaliação do ciclo e morte celular por citometria de fluxo após 72h com a maior concentração dos compostos-teste. RESULTADOS: A via HH está ativada nas células CAL27, SCC4, SCC9 e HSC3. Os inibidores de SMO não apresentaram atividade citotóxica promissora em células de CEO. Com 48h de tratamento, o vismodegib e o itraconazol de 50 μg/mL diminuíram a viabilidade celular (p<0,05). O tratamento com os inibidores de SMO foi capaz de alterar a morfologia celular, diminuir o tamanho celular (FSC) e aumentar a granulosidade (SCC) das células CAL27. Observou-se redução na expressão dos genes HH (PTCH1, SMO e GLI1) já em 24h após o tratamento da CAL27 com os compostos-teste. O vismodegib e itraconazol de 50 μg/mL aumentaram a população celular na fase Sub-G1 e induziram morte celular por apoptose após 72h. CONCLUSÕES: A via HH está ativada nas células de CEO avaliadas neste estudo. O tratamento com vismodegib e itraconazol reduziu a expressão dos componentes desta via na CAL27. Apesar dos inibidores de SMO não apresentarem citotoxicidade promissora nas células de CEO, reduziram a viabilidade celular, alteraram a morfologia das células, aumentaram a fragmentação do DNA e induziram apoptose em células CAL27