Produção de camundongos transgênicos para o estudo de terapias celulares
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Data de Publicação: | 2009 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
Texto Completo: | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/4165 |
Resumo: | A transferência de genes mediada por vírus, em especial pelos vetores lentivirais, é atualmente reconhecida como um eficiente sistema de transmissão de genes, resultando em altas taxas de animais fundadores carreando o transgene. Menos invasiva para os embriões, mais custo-efetivo e tecnicamente menos exigente, optamos por essa metodologia para gerar camundongos transgênicos expressando a proteína fluorescente verde em diferentes órgãos e tecidos, para subsequente uso em terapia celular. Sob controle de três promotores diferentes, ubiquitina-C, que controla a expressão da proteína nos embriões e em todos os tecidos do camundongo adulto, da alfa-miosina cardíaca, que direciona a expressão no coração, e da FmTie, que controla a expressão apenas em células endoteliais de vasos, os zigotos foram microinjetados no espaço subzonal e transferidos para fêmeas pseudogestantes. Dos 31 animais nascidos, 22 animais (72%) apresentam o transgene integrado em seu genoma. Entretanto, nenhum deles expressou a proteína fluorescente verde. Como a inserção no genoma é aleatória, o efeito de posição frequentemente observado pode afetar a expressão do transgene e de genes endógenos, além de interromper estes últimos – mutagênese insercional – levando ao chamado silenciamento gênico. Desta forma, estudos subsequentes devem ser efetuados a fim de solucionar essa ausência de expressão dos transgenes inseridos no genoma dos camundongos fundadores, viabilizando, consequentemente, todo o processo de desenvolvimento de camundongos transgênicos. |
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Silva, Cristina AragãoSoares, Milena Botelho PereiraValle, Maria de Lourdes FarrePaiva, Fabienne Petitinga deSantos, Ricardo Ribeiro dos2012-07-16T19:26:50Z2012-07-16T19:26:50Z2009SILVA, C. A. Produção de camundongos transgênicos para o estudo de terapias celulares. 2009. 103 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa) - Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz, Salvador, 2009.https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/4165A transferência de genes mediada por vírus, em especial pelos vetores lentivirais, é atualmente reconhecida como um eficiente sistema de transmissão de genes, resultando em altas taxas de animais fundadores carreando o transgene. Menos invasiva para os embriões, mais custo-efetivo e tecnicamente menos exigente, optamos por essa metodologia para gerar camundongos transgênicos expressando a proteína fluorescente verde em diferentes órgãos e tecidos, para subsequente uso em terapia celular. Sob controle de três promotores diferentes, ubiquitina-C, que controla a expressão da proteína nos embriões e em todos os tecidos do camundongo adulto, da alfa-miosina cardíaca, que direciona a expressão no coração, e da FmTie, que controla a expressão apenas em células endoteliais de vasos, os zigotos foram microinjetados no espaço subzonal e transferidos para fêmeas pseudogestantes. Dos 31 animais nascidos, 22 animais (72%) apresentam o transgene integrado em seu genoma. Entretanto, nenhum deles expressou a proteína fluorescente verde. Como a inserção no genoma é aleatória, o efeito de posição frequentemente observado pode afetar a expressão do transgene e de genes endógenos, além de interromper estes últimos – mutagênese insercional – levando ao chamado silenciamento gênico. Desta forma, estudos subsequentes devem ser efetuados a fim de solucionar essa ausência de expressão dos transgenes inseridos no genoma dos camundongos fundadores, viabilizando, consequentemente, todo o processo de desenvolvimento de camundongos transgênicos.Gene transfer mediated by viruses, in particular by vectors lentivirais, is now recognized as an efficient system of gene transmission, resulting in high rates of founder animals carrying the transgenesis. Less invasive for the embryos, more cost-effective and technically less demanding, we choose this methodology to generate transgenic mice expressing the green fluorescent protein in different organs and tissues for subsequent use in cell therapy. Using three different promoters as control: ubiquitin-C, which controls the expression of the protein in embryos and in all tissues of adult mice; the alpha-cardiac myosin, which directs the expression in the heart, and FmTie, which controls the expression only in endothelial cells of vessels; the zygotes were microinjected in subzonal space and transferred to pseudopregnancy females.22 animals (72%) of 31 animals born, have integrated the transgene in its genome. However, none of them expressed the green fluorescent protein. How the insertion in the genome is random, the effect of position usually observed may affect the expression of the transgene and of the endogenous genes, stopping them - insertional mutagenesis - leading to genic silencing. Subsequent studies should be done to solve this lack of expression of the transgenesis inserted into the genome of founder mice, enabling the whole process of development of transgenic mice.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilporCamundongos transgênicosTerapia celularProdução de camundongos transgênicos para o estudo de terapias celularesinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2009Centro de Pesquisas Gonçalo MonizFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo MonizSalvadorPós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZORIGINALCristina Aragao Silva. Produção de camundongos transgênicos para o estudo de terapias celulares..pdfCristina Aragao Silva. Produção de camundongos transgênicos para o estudo de terapias celulares..pdfapplication/pdf2328830https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/4165/1/Cristina%20Aragao%20Silva.%20Produ%c3%a7%c3%a3o%20de%20camundongos%20transg%c3%aanicos%20para%20o%20estudo%20de%20terapias%20celulares..pdf174ad1e8df08de4d7fd4ed21f53e51a5MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81990https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/4165/2/license.txtb6ead4607e393dee1190c21ba08397beMD52TEXTCristina Aragao Silva. Produção de camundongos transgênicos para o estudo de terapias celulares..pdf.txtCristina Aragao Silva. Produção de camundongos transgênicos para o estudo de terapias celulares..pdf.txtExtracted texttext/plain127832https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/4165/5/Cristina%20Aragao%20Silva.%20Produ%c3%a7%c3%a3o%20de%20camundongos%20transg%c3%aanicos%20para%20o%20estudo%20de%20terapias%20celulares..pdf.txtd69181d398ccaf2c8951afb217ed0363MD55THUMBNAILCristina Aragao Silva. 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