Estabelecimento de um modelo humanizado em camundongos NOD-SCID IL-2Rγnull (NSG) com potencial translacional para avaliação de novos alvos terapêuticos

• Autor(a) principal: Carla Elizabeth Cunha Machado
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/51855
• topic: Biologia celular; Dengue/etiologia; Camundongos trangênicos; Drogas em investigação; Biologia Celular; Dengue/etiologia; Camundongos transgênicos; Drogas em Investigação

Estudos em humanos são limitados por questões éticas e técnicas. Dessa forma, o uso de camundongos como modelos in vivo e ex vivo, tem proporcionado grandes avanços nas pesquisas, porém ainda não são o suficiente. Assim, o desenvolvimento de camundongos humanizados (hu-camundongos) e sua utilização se faz relevante onde não há outro modelo animal adequado disponível para a pesquisa. Hu-camundongos são definidos como camundongos reconstituídos com células ou tecidos de origem humana e representam uma inovadora ferramenta de estudo in vivo do papel exercido pelo sistema imune humano durante a fisiopatologia de diferentes condições, assim como uma nova abordagem para o estudo da resposta imune humana com potencial translacional e avaliação de novos alvos terapêuticos, principalmente no que concerne a patógenos cujo tropismo é exclusivo das células humanas, como é o caso do vírus da dengue. Assim sendo, o objetivo desse estudo foi estabelecer um modelo de sistema imune humano em camundongos NOD scid IL-2Rγnull (NSG) para avaliação de novos alvos terapêuticos contra a dengue. Para tanto, foram testadas e avaliadas três diferentes fontes de células humanas para humanização dos animais: 1) células tronco progenitoras CD34+ provenientes de fígado fetal humano; 2) células tronco progenitoras CD34+ provenientes de bolsa de leucoaférese enriquecida com GM-CSF (fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos) e, 3) PBMC (células mononucleares do sangue periférico) humano de doadores saudáveis e seus respectivos controles não injetados. As duas primeiras estratégias não resultaram em resultados satisfatórios, o que inviabilizou a continuidade dos experimentos. Assim, a próxima fonte de células foi PBMC’s humanos e, com este modelo, seguimos com os experimentos. Os animais NSG foram injetados com PBMC’s e a presença de células humanas no sangue periférico dos animais foi avaliada semanalmente através de citometria de fluxo. Nossos resultados demonstram que os animais enxertados com PBMC’s humanos apresentaram um percentual médio de reconstituição de células humanas CD45+ superior a 40%, critério utilizado para considerarmos a humanização satisfatória. A avaliação foi feita no sangue, baço e fígado e as células T foram o tipo celular predominantes encontrados nesses sítios. A avaliação histopatológica do fígado demonstrou um recrutamento celular composto por células humanas. Além disso, nossos dados demonstraram que a humanização a partir de PBMC’s não foi associada a perda de peso, morte ou alterações nos parâmetros sanguíneos dos animais. Uma vez atingida a frequência média de 40% de células humanas circulantes, os camundongos humanizados, doravante chamados hu-camundongos, foram infectados por DENV-2 (dengue vírus-2) e acompanhados os parâmetros inflamatórios, histopatológicos, hematológicos e clínicos. A infecção dos hu-camundongos não foi associada a perda de peso ou morte. No entanto, a avaliação dos parâmetros sanguíneos demonstrou que houve uma diminuição de monócitos e aumento de plaquetas no sangue dos animais infectados quando comparados aos não infectados. Entretanto, não houve diferença significativa no percentual de hematócrito e nos níveis circulantes de linfócitos e neutrófilos em relação aos grupos infectados versus não infectados. Adicionalmente, foi possível observar aumento na produção de INFγ (interferon gama) somente nas células TCD4 do baço dos humanizados animais infectados. Os parâmetros histopatológicos avaliados revelaram que houve um recrutamento de células para o tecido e que essas células eram humanas. De modo geral, tal modelo parece ser uma boa estratégia para avaliação de novos alvos terapêuticos contra doenças virais com tropismo por células humanas, em especial, linfócitos humanos, e será mais explorado em nosso laboratório futuramente, podendo expandir nossas investigações para teste de outros patógenos com tropismo por células humanas.