Use of real-time PCR to evaluate two DNA extraction methods from food

• Autor(a) principal: Branquinho, Maria Regina
• Data de Publicação: 2012
• Outros Autores: Ferreira, Renata Trotta Barroso, Leite, Paola Cardarelli
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/8803; http://dx.doi.org/10.1590/S0101-20612012005000012
• topic: Extração de DNA; Organismos Geneticamente Modificados; OGM; Análise de Alimentos; PCR em Tempo Real; Linearidade; DNA Extraction; Genetically Modified Organisms; GMO; Food Analysis; Real-Time PCR; Linearity; Análise de Sequência de DNA; Organismos Geneticamente Modificados; Análise de Alimentos; Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real

A extração de DNA é uma etapa crítica na análise de organismos geneticamente modificados em alimentos por PCR em tempo real. Neste trabalho, os métodos CTAB e DNeasy forneceram preparações de DNA em quantidade e com qualidade a partir de amostras de proteína texturizada de soja, fórmula infantil e extrato de soja. Em relação ao Material de Referência Certificado contendo 5% de soja RoundupReady® , nenhum dos métodos forneceu DNA de boa qualidade. Entretanto, o teste de diluição realizado nos extratos de CTAB não demonstrou interferência de substâncias inibidoras. As eficiências das amplificações do alvo lectin não foram estatisticamente diferentes e os coeficientes de correlação (R2) demonstraram alto grau de correlação entre o número de cópias e os valores de Ct. A ANOVA demonstrou ajuste das curvas de regressão e ausência de desvios significativos. As eficiências das amplificações do alvo p35S, utilizando extratos DNeasy, não foram estatisticamente diferentes e os valores de R2 ficaram acima de 0,98, sem desvios de linearidade. Dois valores de R2, utilizando extratos CTAB, foram menores que 0,98, correspondendo a menor grau de correlação edesvio de linearidade em uma corrida. A análise comparativa dos Cts dos alvos p35S e lectin não demonstrou diferenças significativas entre as curvas analíticas da amplificação de cada alvo.