Padronização dos cortes histológicos de baço a serem usados como fonte de material biológico para o diagnóstico molecular da malária humana.

• Autor(a) principal: Souza, Raimunda Sandra Pacheco
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/56012
• topic: Malária; Plasmodium vivax; Malaria; Plasmodium vivax; Malária

A malária continua sendo um problema de saúde pública e dentre as formas graves da doença encontra-se a malária esplênica ocasionada, principalmente, pelo Plasmodium vivax. O diagnóstico padrão ouro é a gota espessa, porém apresenta limitações como necessidade de microscopistas treinados, leitura difícil e cansativa, etc., dificultando o controle efetivo da malária. O objetivo do estudo foi padronizar cortes histológicos de baço a serem usados como fonte de material biológico para o diagnóstico molecular da malária humana. Foi selecionado uma amostra de baço incluída em parafina sabidamente positiva para P.vivax, foi realizado a microtomia com diferentes quantidades e espessuras, sendo seis, oito, dez, quinze, vinte e vinte e cinco cortes histológico com espessura 10 µm e outros cinco e dez cortes com espessura de 20 µm. Foi realizado a desparafinização com xilol e etanol e álcool 70% ,foi testado uma lavagem com xilol uma com etanol absoluto e uma com álcool a 70%. Uma lavagem de xilol e uma de etanol retirando o álcool 70% e posterior duas lavagens de xilol e etanol, após a desparafinização os tecidos foram secos em temperatura ambiente e pesados em balança analítica. A extração de DNA foi feita com kits comerciais sendo um especifico para sangue (DNA Blood Minikit) e o outro para tecido (QIAamp FAST DNA Tissue kit) . Foi realizada a qPCR para Plasmodium sp. com alvo no gene 18S e P. vivax em regiões conservadas do gene PvmtCOX1. Então, foram selecionadas amostras do anode 2021de um laboratório referência para exame histopatológico em Manaus, Amazonas para serem analisadas como teste, as amostras foram testadas para gênero especifico,e espécie especifico de Plasmodium sp. e também para DNA humano. Padronizou-se cortes histológicos, bem como a desparafinização e método de extração de DNA. A amostra com dez cortes e espessura de 20 µm desparafinada com duas lavagens de xilol e duas de etanol absoluto com peso de 40 mg, com o DNA extraído a partir de ambos os kits, com concentração de DNA de 50ng/µL para kit de sangue e55ng/µL para kit de tecido apresentou-se positiva na qPCR para gênero e espécie especifico. E a amostras analisadas como teste apresentaram-se negativa na qPCR para gênero e espécie espécifico e positiva para DNA humano.