Desenvolvimento e validação de metodologias para determinação de sofosbuvir e seu principal metabólito (GS-331007) em plasma, líquor e fluido seminal por LC-MS

• Autor(a) principal: Vilhena, Leandro Schiavo
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60093
• topic: Zika virus; Efeitos dos fármacos; Sofosbuvir; Farmacologia; Zika virus; Efeitos dos fármacos; Sofosbuvir; Farmacologia

O Zika vírus (ZIKV) ainda é uma ameaça à saúde global, pois, até o momento, inexiste medicamento e vacina, podendo causar severos comprometimentos neurológicos como microcefalia e Síndrome de Guillain-Barré (SGB). Apesar da principal via de transmissão ser a picada do mosquito Aedes, a transmissão sexual da doença merece ser considerada devido à grande persistência viral em fluido seminal. Recentes publicações (2017 - 2020) sinalizaram resultados promissores com o sofosbuvir, um antiviral para Hepatite C. Então, esta pesquisa objetivou desenvolver e validar metodologias (conforme Resolução da ANVISA para validação de metodologias bioanalíticas, RDC nº 27 de 17 de maio de 2012 ) por LC-MS/MS para apurar a concentração de sofosbuvir e seu principal metabólito (GS-331007) em plasma, líquor e fluido seminal humanos e aplicar as metodologias na análise de amostras de um ensaio clínico piloto pioneiro com foco em Zika. O ensaio foi realizado em duas etapas, sendo coletadas amostras nos tempos de 01h:30min e 5h:00min após a administração de um comprimido do medicamento Sovaldi® (400 mg de sofosbuvir). As análises foram realizadas utilizando colunas C18 com a fase móvel composta por solução aquosa de ácido fórmico 0,1 % e metanol:acetonitrila (80:20, v/v). As quantificações foram realizadas em modo positivo utilizando a estratégia de padronização interna. As seguintes relações m/z foram monitoradas: sofosbuvir m/z 530.1>242.8; GS-331007 m/z 260.9>112.9; cimetidina m/z 253.2>117.2 (padrão interno); zidovudina m/z 267.9>127.0 (padrão interno) e diazepam m/z 285.2>193.0 (padrão interno). Previamente à injeção no sistema, as amostras foram extraídas com éter etil-terc- butílico e acetato de etila conforme procedimento desenvolvido e validado. Para quantificação, foram empregadas as seguintes curvas de calibração ponderadas 1/x2 (ng/mL): plasma - 0,50 – 2000 para o sofosbuvir e 2 – 2000 para o GS-331007; líquor - 0,50 – 100 para o sofosbuvir e 5 – 200 para o GS-331007; fluido seminal - 0,50 – 100 para o sofosbuvir e 10 – 1500 para o GS-331007. As metodologias seguiram as especificações da Resolução da ANVISA e foram aplicadas com sucesso ao ensaio piloto.