Reconstrução filogenética e caracterização funcional de genes da família de miosinas em Trypanosoma cruzi

• Autor(a) principal: Souza, Denise Andréa Silva de
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/32873
• topic: Trypanosoma cruzi; Reconstrução filogenética; Genômica funcional; Chagas Disease; Myosins; Parasitology; Genomics; Endocytosis; Enfermedad de Chagas; Parasitología; Genómica; Doença de Chagas; Miosinas; Parasitologia; Genômica; Endocitose

O Trypanosoma cruzi (Classe Kinetoplastea) é o agente etiológico da doença de Chagas, uma doença endêmica de populações rurais que possui uma história de negligência à sua prevenção, diagnóstico e tratamento. A partir do sequenciamento de seu genoma, em 2005, a maioria dos cerca de nove mil genes codificadores de proteínas foi classificada como de função desconhecida/putativa. Dentre estes nove mil genes, há a família das miosinas que, embora sejam conhecidas, tem um alto nível de divergência quando comparada com as miosinas dos demais eucariotos, apresentando domínios até então não associados a esta família. Miosinas são proteínas motoras dependentes de actina, com uma variedade de funções e têm sido usadas para reconstruir a árvore da vida eucariótica, sendo que a inclusão de ramos basais (de origem precoce), como os Kinetoplastea, é fundamental para entender a origem e evolução dos genes dessa família. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo fazer a reconstrução filogenética da família das miosinas em Kinetoplastea, além de realizar a caracterização funcional de genes de miosinas de T. cruzi por meio de nocaute gênico, avaliação do crescimento e diferenciação, infecção de células Vero, análise morfológica por microscopia eletrônica de transmissão e varredura, isolamento de microvesículas (exocitose) e ensaios de endocitose. Os nocautes obtidos para TcMyoA e TcMyoD apresentaram diminuição da metaciclogênese, posição/morfologia dos reservossomos alterada, além de diminuição do conteúdo de transferrina endocitada. A reconstrução filogenética das miosinas em Kinetoplastea revelou ainda que T. cruzi manteve grande parte das miosinas ancestrais, assim como Bodo saltans e alguns tripanossomatídeos. Apesar disto, grande parte da variedade de miosinas encontrada neste grupo foi perdida pela maioria dos tripanossomatídeos, embora interessantes eventos de neofuncionalização tenham ocorrido no decorrer da evolução dessas espécies. Assim, nós apresentamos aqui uma bela história evolutiva da família das miosinas em tripanossomatídeos e a caracterização funcional de alguns desses genes mostrou sua importância em processos celulares como endocitose e metaciclogênese.